Detección de fluorescencia

Detección de nanopartículas fluorescentes: visualización, tamaño y concentración

El marcado con fluorescencia puede utilizarse en cualquier situación en la que sea necesario distinguir un subconjunto de partículas específico dentro de un fondo complejo. Las nanopartículas fluorescentes pueden medirse en términos del tamaño de partícula y la concentración para entender la naturaleza de dichas partículas en medios complejos, como suero de la sangre, que puede inducir la agregación de partículas. Esto tiene aplicaciones para la comprensión del destino de los vectores de dosificación de medicamentos y la toxicología de las nanopartículas en ambientes biológicos, por ejemplo. De manera alternativa, pueden usarse anticuerpos marcados con fluorescencia para el enlace específico con partículas objetivo dentro de una muestra, con el fin de proporcionar un medio para identificar partículas específicas dentro de una muestra desconocida. Esto tiene implicaciones para aplicaciones de diagnóstico, como la investigación de exosomas y microvesículas, en el sentido de que pueden identificarse y monitorearse marcadores específicos en la detección de enfermedades.

La gama de instrumentos NanoSight puede funcionar no solo en el modo de dispersión de luz, en el que se visualizan y miden todas las partículas dentro del instrumento (y por lo tanto no es necesario que la muestra esté marcada con fluorescencia para tomar una medición), sino también en el modo de fluorescencia, en el que solo se miden las nanopartículas fluorescentes.

El sistema NanoSight utiliza fuentes láser de 405 nm (violeta), 488 nm (azul), 642 nm (rojo) o 532 nm (verde) para excitar los fluoróforos adecuados, cuya fluorescencia puede entonces determinarse mediante los filtros respectivos de paso corto o largo.

En el siguiente ejemplo, una mezcla de perlas de poliestireno de 100 nm marcadas con fluorescencia (Fluoresbrite) y de 100 nm no marcadas, en proporción aproximada de 50:50, se analizó mediante el modo de dispersión de luz (línea roja e imagen superior) y un filtrado con fluorescencia (línea blanca e imagen inferior).

Detección de fluorescencia de partículas y nanopartículas