MicroCal PEAQ-ITC

Présentation générale

Le MicroCal PEAQ-ITC est conçu pour une grande simplicité d'utilisation et une sensibilité exceptionnelle. Le système mesure directement la chaleur libérée ou absorbée lors des événements d'interaction biochimique, à partir de laquelle il calcul l'affinité (K_D), la stœchiométrie (n), l'enthalpie (ΔH), et l'entropie (ΔS) de l'interaction. Avec une préparation minimale d'échantillon et une optimisation du système, les données sont générées rapidement et en toute simplicité. La large gamme d'affinité permet l'analyse d'interactions de faible et forte affinité avec une excellente reproductibilité. Le MicroCal ITC est un outil essentiel pour les laboratoires de recherche étudiant les interactions biomoléculaires, dans un contexte où la haute sensibilité et la rapidité des résultats constituent des critères primordiaux.

• Grâce à des processus guidés conviviaux, avec vidéos d'aide intégrées, les utilisateurs de tous niveaux peuvent générer des données de haute qualité.
• Un rapport signal-bruit élevé offre une garantie supplémentaire de la qualité des données et la pertinence des paramètres thermodynamiques et d'affinité générés.
• Le nettoyage automatique au détergent de la cellule d'échantillon et de la seringue de titrage contribue à la production de données reproductibles de grande qualité.
• Tous les paramètres de liaison (affinité, stœchiométrie, enthalpie et entropie) en une seule expérience.
• Premiers résultats obtenus très rapidement sans mise au point, marquage, d'immobilisation, ni aucune limitation de masse molaire.
• Sensibilité pour l'étude des différentes interactions entre biomolécules nécessitant des quantités d'échantillon aussi petites que 10µg.
• Mesure directe des affinités du millimolaire au nanomolaire (K_DS) (de 10^-2 à 10^-9 M).
• Mesure des constantes de dissociation du nanomolaire au picomolaire par des techniques de compétition (de 10^-9 à 10^-12 M).
• Hastelloy non réactif pour la résistance chimique et la compatibilité avec les échantillons biologiques.
• Compatible avec des solvants non aqueux.
• Mise à niveau possible vers le MicroCal PEAQ-ITC entièrement automatisé.

Le MicroCal PEAQ-ITC permet de couvrir une large gamme d'applications, en particulier la caractérisation des interactions moléculaires des petites molécules, des protéines, des anticorps, des acides nucléiques, des lipides et autres biomolécules. Il peut également être utilisé pour la mesure des cinétiques enzymatiques. 

Le logiciel d'analyse MicroCal PEAQ-ITC permet de réaliser des simulations pour concevoir des expériences, l'évaluation par lot d'ensembles de données volumineux et l'évaluation automatique de la qualité des données. Il dispose d'une interface rationalisée qui favorise la production de résultats chiffrés finaux et de graphiques de présentation de qualité, rapidement et en toute simplicité.

• Plusieurs expériences peuvent être ouvertes lors d'une seule session.
• Prend en charge de nombreux modèles d'ajustement automatique.
  • Dissociation.
  • Cinétique enzymatique - Injections multiples.
  • Cinétique enzymatique - Injection unique.
  • Un ensemble de sites.
  • Sites de liaison séquentielle.
  • Un ensemble de sites - SIM.
  • Deux ensembles de sites.
  • Compétition.
• Évaluation automatique de la qualité des données.
  • Données de bonne qualité - Interaction.
  • Données de bonne qualité - Pas d'interaction.
  • Données de mauvaise qualité - Vérifier les données.

Fonctionnement

Les calorimètres de titrage microcalorimétrique isotherme mesurent la variation de chaleur qui a lieu lors de l'interaction entre deux molécules. De la chaleur est libérée ou absorbée du fait de la redistribution et de la formation de liaisons non covalentes quand les molécules en interaction passent de l'état libre à l'état lié. L'ITC surveille ces variations de chaleur en mesurant la puissance différentielle, appliquée aux éléments chauffants des cellules, nécessaire pour maintenir une différence de température nulle entre les cellules de référence et d'échantillon lors du mélange des partenaires de liaison. En général, la cellule de référence contient de l'eau, alors que la cellule d'échantillon contient un des partenaires de liaison (l'échantillon, qui est souvent mais pas forcément une macromolécule) et une seringue d'agitation contenant l'autre partenaire de liaison (le ligand). Le ligand est injecté dans la cellule d'échantillon, généralement par aliquots de 0,5 à 2 μL, jusqu'à ce que la concentration de ligand soit de deux à trois fois supérieure à celle de l'échantillon. Chaque injection de ligand produit une impulsion de chaleur qui est intégrée en fonction du temps et normalisée par rapport à la concentration pour générer une courbe de titrage donnant des kcal/mol en fonction du rapport molaire (ligand/échantillon). L'isotherme qui en résulte est ajustée à un modèle de liaison pour en déduire l'affinité (K_D), la stœchiométrie (n) et l'enthalpie (ΔH) de l'interaction.

Spécifications

Type de mesure	Affinité (KD)
Type de mesure	Enthalpie ∆H
Type de mesure	Entropie ∆S
Type de mesure	Stœchiométrie (n)
Volume d'échantillon	280 µL
Volume de la cellule	200 µL
Volume de la seringue d'injection	40 µL
Précision du volume d'injection	< 1 % à 2 µL
Débit d'échantillon	De 0 à 12 par journée de 8 h
Matériau de la cellule	Hastelloy
Cellule	En forme de pièce de monnaie
Bruit de fond	0,15 ncal/s
Plage de température	De 2°C à 80°C
Stabilité en température	±0,00012 °C
Temps de réponse	8 s*
Modes de feedback multiple	Oui (passif, gain élevé, gain faible)
Notes	*The MicroCal PEAQ-ITC Instrument Response Time is a true time constant.  It is the time interval between the first deviation away from the baseline, and the point on the peak that is 63% of the maximum peak height.

Environnement opératoire

Température (de fonctionnement)	De 10°C à 28°C
Humidité	De 0 % à 70 % HR, sans condensation

Classification électrique

Alimentation	100 - 200 V, 50/60 Hz, 130 W
Poids	13,6 kg
Dimensions (l, P, H)	43 x 38 x 46 cm (calorimètre + station de nettoyage)