ITC細胞清洗的技巧

清洗的影響因素有三個。

・清洗液（是否有能力有效去除細胞內的汙垢）

・頻率（多頻繁重複進行“清洗”操作）

・溫度（在將清洗液充填到兩個細胞後，設定的溫度是多少）

按清洗液＞頻率＞溫度的重要性排序。接下來將進行概述。

清洗液

清洗液的基本原則是，不會溶解設備，只溶解汙垢。

ITC的細胞使用哈氏合金C276，另外作為支撐材料使用了塑膠樹脂和不鏽鋼。在使用清洗液時，請務必選擇那些不會腐蝕或溶解這些材料的清洗液。我們推薦14% DECON90（或20% Contrad70），使用其他的會有一定的風險。

在利用蛋白質或核酸等普通樣品進行測量時，14%的DECON90溶液可以應對大多數汙垢。此外，對於新設備或定期維護的設備，14% DECON90在大部分情況下是有效的。

但是，根據汙垢的程度和類型，使用DECON90可能無法有效去除。例如，最近有使用高疏水性的低分子化合物作為樣品的用戶。當細胞汙垢成為問題時，50%DMSO溶液已被證實能有效清洗。根據不同需求，選擇如下的清洗液。

・14%(v/v) DECON90水溶液

・1-5N NaOH水溶液

・50%(v/v) DMSO水溶液

・稀釋的家用洗碗液

・2倍稀釋的管道清潔劑（Johnson Co.的“PipetUnish”）

・1%（w/v）檸檬酸水溶液

・含有蛋白分解酵素的清潔劑

頻率

即使在相同的清洗液和浸泡條件下，通過重複進行清洗也有可能去除汙垢。特別是當汙垢累積時，單次清洗可能不夠。在通過水滴定等測試清洗效果的同時，使用有效的清洗液重複幾次，完全恢復基線和滴定熱成像。

溫度

與家用清潔劑類似，對於頑固汙垢，加熱清洗液可以提高清洗效果。在高溫下，可能會對細胞造成腐蝕等損傷，因此請務必參閱文獻確認藥品對細胞單元的化學耐受性。設備附帶的用戶手冊（英文）結尾處記載了構成細胞單元的材料（金屬、樹脂類）資訊。如有疑問，請諮詢。

以下為具體的清洗方法。

＜操作前的注意事項＞

・清洗液有強鹼性或有害性。在操作時，務必佩戴適當的防護裝備。

・長時間的浸泡可能會造成溶液乾固、沉積、汙垢粘附等風險。

最壞情況下可能對細胞造成不可逆的損傷。操作時請自行承擔責任。

・根據汙垢程度，請限制溶液交換時間最長為1小時。切勿通宵浸泡。

＜使用的物品＞

・清洗液

・氣密注射器

・清潔設備（適用於使用VP-ITC的客戶，附帶的ThermoVac可用於向樣品細胞內送液的清洗工具）

・化妝品分裝用注射器（可在100日元商店購買，尖端平坦的20 mL產品易於使用）

＜使用的清洗液及條件＞

・14% DECON90水溶液（對蛋白質和其他汙垢有效，通常用於維護的推薦清洗液。最大浸泡溫度60℃，不得超過1小時）

・5N-NaOH水溶液（對蛋白質、肽、核酸等有效。最大浸泡溫度60℃，不得超過1小時）

・50% DMSO水溶液（在使用高疏水性低分子化合物的情況下有效。最大浸泡溫度50℃，不得超過30分鐘）

其他使用經驗的清洗液：

・稀釋的家用洗碗液（稀釋2到5倍左右，對脂質及其他油性有效，註明有去油斑功效的產品，最大浸泡溫度50℃，不得超過30分鐘）

・2倍稀釋的管道清潔劑（對有顏色的物質或汙垢、蛋白質等有效，使用“PipeUnish Pro”，最大浸泡溫度50℃，不得超過30分鐘）

・1%檸檬酸（對溶於酸中的汙垢、使用樣品含Ca、Mg等Buffer情況下有效，最大浸泡溫度50℃，不得超過30分鐘）

・1% Zymit（含有蛋白分解酵素的清洗液。購買原液，按製造商指定的濃度稀釋使用。最大浸泡溫度25℃，不得超過12小時）

＜清洗操作＞

1）從Sample/Reference兩個細胞中取出超純水，移除Reference cell plug

2）使用氣密注射器向兩個細胞中注入清洗液（與注入樣品時相同方式操作）

3）慢慢進行打泵操作，讓清洗液充分浸潤整個細胞

4）一次性倒掉兩個細胞中的清洗液

5）再次注入清洗液到兩個細胞中（將溢出的清洗液去除，與注入樣品時相同方式操作）

6）設定細胞溫度為目標溫度

7）蓋上紙巾等物於細胞孔以防止雜物進入

8）根據汙垢的程度，浸泡時間10分鐘至最大1小時左右

9）浸泡後將細胞溫度調回25℃（註意：在清洗液溫熱時插入氣密注射器可能會損壞注射器或使細胞內容物飛出）

10）使用氣密注射器小心取出已冷卻的清洗液，然後立即用充足的超純水沖洗注射器

11）用氣密注射器注入超純水到兩個細胞中，慢慢進行打泵操作。上下移動數次，沖洗整個細胞

12）至少對Sample/Reference各用總量50-100mL的超純水進行沖洗，Sample cell的清洗用清潔設備效果良好

13）Sample cell的杯部和Reference plug插入的部分可能沾有清洗液，請適時沖洗

14）將氣密注射器的針緩慢插入細胞內，以避免損傷細胞底部，避免對紅底部造成傷害，在沖洗時注入量不應超出細胞口

15）沖洗完畢後，將超純水充填至兩個細胞中

＜清洗操作時的注意事項＞

・請充分用超純水沖洗兩個細胞。Sample cell可以使用ThermoVac/Cleaning Device來清洗。

但Reference cell無法進行任何沖洗，請同樣對Reference cell進行沖洗。