Dicas para Limpeza de Células ITC

Existem três fatores que influenciam a limpeza.

• Solução de limpeza (se possui capacidade de remover efetivamente a sujeira dentro da célula)

• Frequência (quantas vezes a operação de ‘limpeza’ é repetida)

• Temperatura (a qual temperatura termostatizar após encher ambas as células com a solução de limpeza)

Acredita-se que a ordem de importância é solução de limpeza > frequência > temperatura. Resumiremos nos próximos tópicos.

Solução de Limpeza

O princípio fundamental da solução de limpeza é que ela deve dissolver sujeira sem dissolver o aparelho.

As células do ITC usam Hastelloy C276, e também utilizam resinas plásticas de suporte e aço inoxidável. Ao usar a solução de limpeza, certifique-se de escolher uma que não cause corrosão ou dissolução desses materiais. Além das soluções recomendadas de 14% DECON90 (ou 20% Contrad70), o uso de outras soluções pode apresentar alguns riscos.

Nas medições usando amostras normais, como proteínas ou ácidos nucleicos, a solução de 14% DECON90 pode lidar com a maioria das sujeiras. Além disso, aparelhos novos ou que recebem manutenção regular podem ser limpos com 14% DECON90 em quase todos os casos.

No entanto, dependendo do tipo e grau de sujeira, a limpeza com DECON90 pode não ser eficiente. Recentemente, compósitos de baixo peso molecular hidrofóbicos têm sido usados como amostras. Foi confirmado que a limpeza com solução de 50% DMSO é eficaz nesse caso. Outras soluções de limpeza podem ser escolhidas conforme necessário.

• Solução aquosa de 14%(v/v) DECON90

• Solução aquosa de 1-5N NaOH

• Solução aquosa de 50% (v/v) DMSO

• Detergente doméstico diluído

• Limpeza de tubulações diluída 2 vezes (Johnson Pipe Unish)

• Solução aquosa de ácido cítrico a 1% (w/v)

• Detergente com enzimas de degradação de proteínas

Frequência

Com a mesma solução de limpeza e condições de imersão, pode ser possível remover a sujeira repetindo o processo várias vezes. Quando a sujeira se acumula, uma única limpeza pode ser insuficiente. Meça a eficácia através de titulações de água para água e repita o procedimento até que resíduo e termogramas de titulação estejam recuperados.

Temperatura

Assim como detergentes domésticos, o efeito da limpeza é aumentado ao aquecer a solução de limpeza para remover sujeiras persistentes. Sob altas temperaturas, podem ocorrer danos por corrosão às células; portanto, certifique-se de verificar a resistência química através da literatura. A composição das células (metais, resinas) está no manual do usuário (em inglês). Em caso de dúvidas, entre em contato.

A seguir, os métodos de limpeza específicos.

＜Avisos antes da operação＞

• As soluções de limpeza são de base forte ou tóxicas. Utilize sempre o equipamento de proteção adequado.

• Longas imersões podem levar a solidificação, precipitação e fixação de sujeira ao esquecer de enxaguar.

A possibilidade de danos irreversíveis às células é grave. Realize operações por sua conta e risco.

Dependendo do grau de sujeira, troque as soluções dentro de uma hora. Não deixe em imersão durante a noite.

＜Materiais necessários＞

• Solução de limpeza

• Seringa hermética a gás

• Dispositivo de Limpeza (para usuários VP-ITC. Ferramenta de limpeza incluída no ThermoVac)

• Seringa cosmética (disponível em lojas de 100 ienes. Seringa de 20 mL com ponta reta é conveniente)

＜Soluções de limpeza e condições＞

• 14% DECON90 (eficaz para proteínas e sujeira, solução de limpeza recomendada. Máxima temperatura 60°C, não exceder 1 hora)

• 5N-NaOH (eficaz para proteínas, peptídeos e ácidos nucleicos. Máxima temperatura 60°C, não exceder 1 hora)

• 50% DMSO (eficaz para compostos de baixo peso molecular hidrofóbicos. Máxima temperatura 50°C, não exceder 30 minutos)

Outras soluções testadas:

• Detergente doméstico diluído (2x a 5x, eficaz para lípidos e óleos. Não exceder 50°C e 30 minutos)

• Limpeza de tubulação diluída 2x (eficaz para proteínas e sujeira colorida. Não exceder 50°C e 30 minutos)

• 1% ácido cítrico (para sujeira solúvel em ácidos, amostras com Ca, Mg. Não exceder 50°C e 30 minutos)

• 1% Zymit (detergente com enzimas. Dilua conforme indicado pelo fabricante. Não exceder 25°C e 12 horas)

＜Operação de limpeza＞

1) Remova a água ultrapura de ambas as células. Remova o plug da célula de referência.

2) Use a seringa hermética a gás para encher ambas as células com a solução de limpeza (da mesma forma que enche células com amostras).

3) Realize a operação de bombeamento lentamente para permitir que a solução de limpeza se espalhe na célula.

4) Descarte a solução de limpeza das duas células.

5) Reencha ambas as células com solução de limpeza (remova o excesso de solução).

6) Defina a temperatura da célula para o valor desejado.

7) Cubra os portos celulares com toalhas de papel para evitar o ingresso de detritos.

8) Deixe de molho entre 10 minutos e 1 hora, dependendo da sujeira.

9) Após a imersão, volte a temperatura da célula para 25°C (Nota: Soluções quentes podem danificar seringas).

10) Use a seringa para retirar a solução de limpeza aquecida e enxague com água ultrapura imediatamente.

11) Preencha novamente ambas as células com água ultrapura e bombeie lentamente. Enxague várias vezes.

12) Enxague no mínimo 50-100 mL de água ultrapura em cada célula. Utilize o dispositivo de limpeza na célula de amostra.

13) Lave também partes que podem ter sido atingidas por solução de limpeza, como as bordas da célula de amostra e o plug de referência.

14) Ao manipular a seringa na célula, seja cuidadoso para não arranhar o interior com a ponta metálica.

15) Depois de finalizar, encha ambas as células com água ultrapura.

＜Notas sobre a operação de limpeza＞

• Enxágue ambas as células adequadamente com água ultrapura. Para a célula de amostra, o uso do ThermoVac/Dispositivo de limpeza é útil.

Entretanto, a célula de referência também deve ser enxaguada, pois não há outra forma de limpar.