Atenção usuários do MicroCal DSC! Perguntas Frequentes sobre o Sistema DSC

por Malvern Panalytical, Monday, 25th February 2019

Verna Frasca, gerente de aplicação dos produtos MicroCal, responde às perguntas frequentes sobre o novo produto MicroCal DSC, PEAQ-DSC. Também serão fornecidas dicas úteis que podem interessar aos usuários do VP-Capillary DSC. Não deixe de conferir.


Leia este artigo em inglês aqui（Texto original aqui）

【Q1: Qual a quantidade necessária de amostra?】

O PEAQ-DSC Automated requer um volume mínimo de 325 μL, incluindo o volume morto. Na prática, 300 μL são preenchidos na célula. Nesse momento, assegure-se de posicionar corretamente a solução na placa de 96 poços.

A placa de 96 poços pode ser preenchida até 400 μL. Nas configurações de “Load Settings”, insira no “Well Plate Volume (μL)” a quantidade de solução realmente configurada. (Figura 1) O PEAQ-DSC Automated leva em consideração a diluição da solução provocada pelo amostrador automático através do software. Durante a análise, o fator de diluição é aplicado às informações de concentração realmente inseridas.

Figura 1.

No Manual PEAQ-DSC, são preenchidos 250 μL usando uma micropipeta fornecida. Recomenda-se preparar a amostra com 270 a 280 μL para maior segurança. No sistema manual, não é necessário considerar a diluição da solução.

【Q2: Quantas vezes devo realizar o escaneamento “Warm up” para estabilizar o histórico térmico?】

No DSC, é importante repetir os ciclos de aquecimento/resfriamento antes de medir a amostra para estabilizar o histórico térmico do sistema a partir do estado de espera. Tanto no Manual quanto no PEAQ-DSC Automated, se o sistema estiver limpo, a execução de escaneamentos de água-água ou tampão-tampão, pelo menos 2 a 3 vezes antes de medir a amostra, são suficientes para o Warm up.

No PEAQ-DSC Automated, ao configurar o Tipo de Amostra para Buffer, é possível marcar a opção de “Avaliação” nas Configurações, realizando automaticamente até 5 escaneamentos até que o Warm up esteja completo.

【Q3: O que é “Number of Purge Refills” no PEAQ-DSC Automated (Figura 2)? Como configurá-lo?】

“Number of Purge Refills” é a configuração que determina quantas vezes a solução no poço será injetada e aspirada pela seringa antes de ser preenchida na célula a partir da placa de 96 poços. No amostrador automático, definir soluções com alta concentração de sal, por exemplo, no prato pode causar gradientes de concentração. Caso a injeção e aspiração sejam realizadas apenas uma vez, podem ocorrer desvios de concentração e a capacidade térmica da solução pode variar, comprometendo a reprodutibilidade dos dados. Recomenda-se repetir pelo menos 3 vezes o procedimento de Limpeza/Reabastecimento. Caso a solução esteja ajustada para mais de 325 μL ou tenha alta viscosidade, sugere-se realizar 5 vezes.


Figura 2.

No VP-Capillary DSC, a função correspondente é “Number of Filling Strokes” na aba “Advanced”. Recomenda-se utilizar a configuração de 3 a 5 vezes, como no PEAQ-DSC Automated.

【Q4: Quais são as diferenças nas configurações de limpeza e qual delas devo usar?】

Manter a célula do DSC limpa é fundamental para obter dados de alta qualidade. O PEAQ-DSC Automated possui três opções de limpeza. Os detergentes recomendados são 14% Decon90 ou 20% Contrad70. O detergente é configurado no Reservatório 1.

A opção de limpeza selecionada será realizada após o término do escaneamento e antes do preenchimento da próxima amostra. (Nota: No VP-Capillary DSC, a limpeza ocorre antes do início do escaneamento, após a medição da amostra anterior.)

  • Enxaguar: A célula é lavada com água após o escaneamento. Recomenda-se o Enxágue para medições de água-água ou tampão-tampão.
  • Lavar: A célula é lavada na ordem de detergente e água após o escaneamento. Recomenda-se o Lavar em cada escaneamento de amostra.
  • Scan: A célula é preenchida com detergente após o escaneamento e aquecida de acordo com a próxima condição agendada, seguida de lavagem com água. Defina Tend para 80 °C para evitar danos à célula. Recomenda-se realizar o Scan após o último escaneamento de amostra ou em cada escaneamento para amostras viscosas. Os dados do Scan são salvos como “DETERGENTSCAN.dscx”, mas não são usados para análise, portanto, não são incluídos no arquivo DMES.

Se escolher “Lavar” ou “Scan”, o volume de água padrão para lavagem é de 5 mL, mas pode ser aumentado. Ao usar 14% Decon90 (ou 20% Contrad70) no PEAQ-DSC Automated, 5 mL de lavagem com água é suficiente. Contudo, dependendo das condições da amostra ou outros detergentes usados, o usuário deve decidir o volume de água necessário. Esteja ciente disso.

Além disso, preste atenção ao estado da célula no início do PEAQ-DSC Automated. Ao iniciar o sistema, a célula é esvaziada primeiro e o líquido é carregado diretamente da placa de 96 poços sem limpeza prévia. Se não for utilizado por longos períodos ou se não houver certeza sobre a limpeza da célula, selecione um método de limpeza adequado na tela de “Manutenção” e execute-o. No PEAQ-DSC Automated, se a limpeza não for realizada por um período, um alerta é exibido. (Figura 3)


Figura 3.

No VP-Capillary DSC, as configurações de limpeza da célula também estão disponíveis na aba “Manutenção”. (Figura 4)

Figura 4.

No Manual PEAQ-DSC, recomenda-se realizar a limpeza com 14% Decon90 (ou 20% Contrad70) seguindo o vídeo incluso no software.

【Q5: Qual é o Material de Referência usado na entrega ou na Qualificação Operacional (OQ) do PEAQ-DSC? Posso usá-lo como amostra de verificação?】

O Material de Referência MicroCal PEAQ-DSC é um oligonucleotídeo disponível para compra. (Nome do produto: Kit de Material de Referência, Número de catálogo: MCL2015) Ele também pode ser usado no VP-Capillary DSC. Este kit contém os reagentes necessários para executar o método recomendado duas vezes.

【Q6: Por que não há configuração “Filtering Period” no PEAQ-DSC, quando era necessário no VP-Capillary DSC?】

No PEAQ-DSC, o Filtering Period é automaticamente ajustado com base na Taxa de Escaneamento. Quanto mais rápida a Taxa de Escaneamento, mais curto é o Filtering Period (em segundos). No termograma resultante, o número de pontos de dados é ajustado para ser o mesmo para qualquer Taxa de Escaneamento.

【Q7: Quais configurações Load/Scan frequentemente usadas posso salvar ao montar um método no PEAQ-DSC?】

Selecione as configurações Load que deseja salvar, clique no botão “Save”, e forneça um nome adequado para salvar. As configurações salvas são exibidas em cinza sob as configurações padrão “Load” e “Scan”.


Figura 5.

【Q8: Como posso corrigir a concentração de uma amostra errada?】

Abra os dados na tela “Análise” e avance para a tela “Fit”. Insira a concentração correta em “Concentration (M)” abaixo do termograma. Note que a diluição decorrente do amostrador automático não é automaticamente refletida e deve ser calculada previamente. O fator de diluição também muda dependendo do volume de amostra ajustado, então preste atenção nisso.
Ao recalcular a concentração, considere os 22 μL de tampão remanescente na seringa. Por exemplo, ao ajustar 325 μL de uma amostra de 10 μM em um poço, insira 10e-6*325/(325+22)=9.37e-6 em Concentration (M).

Se quiser alterar a concentração de várias amostras de uma só vez, selecione e destaque-as na lista de “Registros” e insira as informações corretas em “Concentration (M)”. Se os dados estiverem antes do modelo de ajuste, clique em “Restaurar” para confirmar. Se foram ajustados por Two-state ou Non-Two-State, clique em “Fit” para confirmar.


Figura 6.

Após alterar a concentração, um asterisco (*) será adicionado próximo ao nome da amostra na lista de “Registros”, bem como em “[Célula] (M)” nas “Informações do Registro”. (Figura 7)


Figura 7.

É recomendável salvar o arquivo alterado com um nome diferente.

【Q9: Como posso exportar os dados do DSC?】

No PEAQ-DSC, é possível salvar como gráfico ou em formato CSV. Vá para a tela “Relatórios” e escolha o formato do Relatório desejado. Selecione os dados que deseja exportar na lista “Registros”. (É possível selecionar múltiplos) No canto superior direito da tela exibindo os dados desejados, clique no ícone do Menu de Exportação para ver “Exportar Dados” e “Exportar Imagem”. (Figura 8) “Exportar Dados” salva em formato CSV. “Exportar Imagem” salva o gráfico no formato desejado.


Figura 8.

【Q10: Onde posso obter o software ou manual de instruções mais recente?】

A versão mais recente do software do PEAQ-DSC atualmente é 1.30. Está disponível nos seguintes sites. (a partir de 26 de fevereiro de 2019)

Para obter informações sobre atualizações de software, clique nas notificações “SOFTWARE UPDATE NOTIFICATION [SUN]” para mais detalhes.

Para dúvidas sobre MicroCal PEAQ-DSC ou solicitações de medição de amostra, clique aqui
Para saber mais sobre MicroCal PEAQ-DSC, clique aqui
Para aprender sobre o princípio do calorímetro, uso e dicas de medição, clique aqui

Solicitação de orçamento / Solicitação de demonstração / Contato comercial

Artigos recomendados

Para perguntas, entre em contato aqui≫

Este artigo pode ter sido traduzido automaticamente