Se você precisar da nota técnica completa, envie um e-mail com o título do post, o nome da sua empresa/nome/email para

info.korea@malvern.com . Ou, 

você pode clicar no título abaixo para acessar a página de download completo. 

Determinação do Peso Molecular da Proteína: 

SEC-MALS vs Calibração Convencional

As propriedades físicas e o comportamento das proteínas em solução variam de acordo com vários fatores relacionados à pureza e formulação da proteína, bem como suas características intrínsecas.

A cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) é uma ferramenta poderosa comumente utilizada para analisar características como refino, peso molecular e agregação de proteínas. 

O princípio da SEC está relacionado à separação de amostras enquanto passam por um matriz de coluna permeável e inerte. Moléculas pequenas penetram mais profundamente nos poros, enquanto moléculas grandes são excluídas, atravessando a coluna mais rapidamente. O resultado é uma separação baseada no volume de hidratação, embora o objetivo final muitas vezes seja determinar o peso molecular.

 Anteriormente, o peso molecular era estimado comparando-se o tempo de eluição da proteína desconhecida com proteínas padrão de anel com peso molecular conhecido, método esse chamado ‘Calibração Convencional’, geralmente realizado usando detectores de concentração simples como UV.  

< Sistema Malvern Viscotek SEC-MALS 20 > 

No entanto agora é possível medir o peso molecular de proteínas usando detectores de espalhamento de luz junto com detectores de concentração (UV ou índice de refração, RI) independentemente do tempo de retenção.  Isso é especialmente útil porque a maioria das proteínas não tem estruturas anulares, resultando em medições de peso molecular imprecisas. A adição de um segundo detector de concentração, IV (viscosidade intrínseca), DLS (espalhamento de luz dinâmico) etc., pode aumentar significativamente a quantidade de informações disponíveis em uma única medição SEC.

O sistema Malvern Viscotek SEC-MALS 20 é um equipamento de espalhamento de luz com 20 ângulos de detecção, permitindo a medição do peso molecular de proteínas independentemente do volume de eluição.  Esta nota de aplicação oferece uma visão sobre a separação de várias proteínas utilizando o SEC. 

Também se discute a diferença nos resultados ao medir o peso molecular usando MALS (Espalhamento de Luz em Múltiplos Ângulos) ou Calibração Convencional.