Por que você precisa medir a carga de superfície do mRNA-LNP (e como fazê-lo)

Em um blog anterior, abordamos a importância de (e as técnicas para medir) o tamanho das nanopartículas lipídicas (LNPs). Aqui, voltamos nossa atenção para a carga de superfície, oferecendo insights de especialistas sobre por que e como medi-la da melhor forma.  

Carga de superfície: uma medição chave para LNPs

O interesse nas LNPs explodiu nos últimos anos. E não é difícil entender por que – esses pequenos vetores oferecem o potencial de direcionar algumas das condições médicas mais desafiadoras e podem ser fabricados em escalas muitas vezes não possíveis com outros vetores de entrega de medicamentos.  

Desenvolver e fabricar terapias e vacinas baseadas em LNP continua sendo um grande desafio. Com as LNPs sendo tão complexas, a caracterização analítica é excepcionalmente difícil — pode ser complicado saber quais atributos medir e quais ferramentas analíticas ajudarão a responder às suas perguntas.  

Um olhar sob a superfície da medição de carga de superfície  

Então, qual é a questão com a carga de superfície? Por que você deve medi-la? E o que ela pode lhe dizer?   

A carga de superfície — também conhecida como potencial zeta — é um atributo crucial a ser medido no desenvolvimento de LNPs. Não só oferece insights sobre o destino e atividade in vivo da sua terapia (a carga de superfície é talvez o determinante mais importante da solubilidade e interação com a membrana celular), mas também pode fornecer informações sobre a química de superfície das suas LNPs (e quaisquer modificações que possam ocorrer durante o desenvolvimento e fabricação).  

ELS — a ferramenta de escolha para medição de carga de superfície  

Dispersão de luz eletroforética (ELS) é a técnica ideal para medir a carga que suas LNPs adquirem em um determinado meio.  

ELS é uma técnica simples que funciona no princípio da eletroforese. A solução de LNP é introduzida em uma célula contendo dois eletrodos (veja a Figura 1), um campo elétrico é aplicado através deles, e as partículas carregadas (neste caso, as LNPs) migram em direção ao eletrodo de carga oposta com uma velocidade relacionada ao seu potencial zeta. 

Um laser é passado pelo fundo da célula, com as partículas carregadas dispersando a luz. Como a luz dispersa tem sua frequência alterada em proporção à velocidade das partículas, medir a velocidade dessa forma permite aos analistas calcular o potencial zeta.   

Normalmente, o ELS é usado para explorar a carga de superfície das LNP em solução salina tamponada com fosfato (PBS) ou em uma versão diluída em 10x de sua amostra, onde os analistas podem validar a carga de superfície aparente da LNP ou avaliar diferentes formulações de LNP para estabilidade e eficiência de absorção prevista, respectivamente. (É claro que há muitas outras boas razões para aplicar o ELS na caracterização de LNPs, que você pode descobrir no eBook.) 

Obtendo as melhores medições de carga de superfície  

Importante, vários fatores podem impactar o potencial zeta de uma partícula, incluindo:  

• Alterações no pH  
• Força iônica  
• A concentração de outros componentes na solução  

Para garantir medições reprodutíveis de potencial zeta, é crucial que você informe o tampão da amostra utilizado em suas medições, bem como a condutividade correspondente para o valor do potencial zeta.  

Superando um desafio chave   

Mesmo que você leve em conta as recomendações acima em suas medições de potencial zeta, ainda pode ser impactado talvez pelo maior desafio nas medições de potencial zeta: amostras de alta condutividade.  

Quer saber mais sobre esse desafio e como superá-lo da melhor forma para garantir as medições de carga de superfície mais precisas? Então confira nosso eBook repleto de insights, “Superando desafios na análise de vetores LNP: ferramentas, técnicas e considerações chave“ desenvolvido por nossos especialistas analíticos.  

Nele, cobrimos tudo o que você precisa saber para caracterizar suas LNPs com mais confiança, ajudando você

• a desbloquear insights mais profundos
• minimizar o uso de amostras
• economizar tempo
• e reduzir custos.  

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