Cromatografia líquida

A cromatografia líquida é uma técnica usada para separar uma amostra em partes individuais. Essa separação ocorre baseada em interações químicas ou físicas da amostra nas fases móveis e fixas. Como há muitas combinações de fase móvel/fixa que podem ser empregadas ao separar uma mistura, há vários tipos diferentes de cromatografia classificados com base nos estados físicos dessas fases. A cromatografia de coluna líquida-sólida, a técnica de cromatografia mais popular, possui uma fase móvel líquida que filtra lentamente por meio da fase fixa sólida, trazendo os componentes separados com ela.

Se baseia nas bombas para passar um solvente líquido pressurizado que contém a mistura de amostra por meio de uma coluna preenchida com um material absorvente sólido. Cada componente da amostra interage, de forma um pouco diferente, com o material absorvente, causando taxas de transporte diferentes para os diferentes componentes e levando à separação de componentes enquanto saem da coluna.

Há muitos tipos diferentes de sistemas e técnicas de cromatografia disponíveis para uma ampla variedade de aplicações. A Malvern Panalytical oferece uma variedade de sistemas e detectores avançados para cromatografia de exclusão de tamanho (SEC). A cromatografia por exclusão de tamanho, também conhecida como cromatografia de permeação em gel (GPC) ou cromatografia de filtração em gel, é usada para a medição do peso molecular absoluto, tamanho molecular, viscosidade intrínseca, ramificação e outros parâmetros físicos.

Essa técnica separa partículas com base no tamanho molecular (pelo raio Stokes de uma partícula). A SEC é usada principalmente para a análise de moléculas grandes, como proteínas, polímeros e polissacarídeos. A SEC não trabalha por interação ou afinidade química, mas por interação física com o meio poroso das colunas de cromatografia – esta é a notória diferença entre SEC/GPC e muitas outras técnicas de cromatografia líquida.  A interação química da amostra com a coluna não é necessária ou desejada.

Em colunas da SEC, as moléculas menores na amostra poderão entrar nos poros do meio poroso, residir por mais tempo ou entrar nos poros com mais frequência. Por outro lado, as moléculas maiores na amostra têm mais restrições quanto ao tamanho dos poros que podem entrar, entrar com menos frequência ou apenas por passar pelos poros, caso sejam muito grandes para entrar nos poros. Portanto, as moléculas maiores seguirão por meio da coluna mais rapidamente do que as moléculas menores, ou seja, quanto menor a molécula, maior será o tempo de retenção.   No SEC/GPC, lembre-se de que os grandes vêm primeiro.