Nesta nota técnica, mostramos como o WAVE da Creoptix pode ser usado para medir com precisão cinética de taxa de dissociação rápida de moléculas de ligação fraca. Graças a um design de cartucho que permite tempos de transição ultrarrápidos de 150 ms, os hits de baixa potência agora podem ser facilmente detectados para uma descoberta de medicamentos mais bem-sucedida.
Aglutinantes fracos, como os encontrados em bibliotecas de triagem baseadas em fragmentos, são normalmente classificados por afinidade em vez de cinética. Isso ocorre porque a instrumentação padrão não tem capacidade de medir taxas de dissociação rápidas. No entanto, medir a afinidade em vez de taxas de dissociação pode gerar um grande número de resultados falsos positivos, estendendo os fluxos de trabalho e incorrendo em custos desnecessários.
Empregando uma tecnologia patenteada de Interferometria acoplada a grade (GCI), o WAVE da Creoptix oferece resolução de taxas de dissociação rápidas de até 10s-1. Isso permite a seleção precisa e inicial de hits verdadeiros para aumentar consideravelmente a eficiência.
Medindo a cinética de ligação da metil-sulfonamida à anidrase carbônica II, mostramos que o sistema WAVEsystem da Creoptix alcança uma resolução excepcional a taxas de dissociação extremamente rápidas, mesmo para grandes proporções de peso molecular de alvo para analito.
| Dados cinéticos | |||
|---|---|---|---|
| WAVE da Creoptix | Biacore™ S51 | ||
| kassociado (M-1 s-1) | 9,36 x 103 | kassociado (M-1 s-1)
|
8,05 x 103 |
| kdissociado (s-1) | 2,86 | kdissociado (s-1)
|
2,21 |
| KD (uM) | 306 | KD (uM) | 274 |
Tabela 1: dados cinéticos em comparação com dados publicados em Myszka, David G. “Analysis of small-molecule interactions using Biacore S51 technology”. Analytical biochemistry 329.2 (2004): 316-323.
Legenda: (A) Sensorgrama da ligação de metil-sulfonamida (95,1 Da) com anidrase carbônica II (29 kDa) imobilizada por acoplamento de amina em um PCH WAVEchip a 8500 pg/mm2 na célula de fluxo 1. Os dados foram adquiridos a 40 Hz com uma taxa de fluxo de 200 μl/min. (B) Aplique zoom na fase de associação (esquerda) e na fase de dissociação (direita) com as respectivas plotagens de distribuição residual abaixo mostrando a resolução alta e clara da cinética.
![[Figura 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg] Figura 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg](https://p3.aprimocdn.net/malvernpanalytical/8ddb9b09-3dfd-400a-91e2-ae360106df9b/Figure%201%20TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives_Original%20file.jpg)
Figura 1: Ligação de Metil-sulfonamida (95,1 Da) com anidrase carbônica II (CAII). 1 pg/mm2 = 1 RU
