Las mejores prácticas para la Calorimetría de Titración Isotérmica para estudiar interacciones de unión – Parte 2

Aquí está el segundo blog de mejores prácticas para realizar experimentos tradicionales de unión con los sistemas MicroCal PEAQ-ITC, VP-ITC y sistemas ITC200. 

Aquí está el primero: Las mejores prácticas para ITC para estudiar interacciones de unión – Parte 1

Preparando el ITC:

• Realizar una inspección visual del sistema ITC y verificar conexiones de cables sueltas, jeringa de inyección dañada, conexiones de tuberías con fugas, decoloración alrededor de la celda, etc.
• Asegúrese de que haya agua en la celda de referencia del ITC y sustituya el agua regularmente durante el uso del ITC (se recomienda una vez a la semana).
• Asegúrese de que el ITC y el controlador estén encendidos, el software de control esté abierto, el instrumento esté en línea y el termostato del instrumento esté ajustado a la temperatura experimental.
  • Los ITC de MicroCal pueden dejarse encendidos indefinidamente y termostatizados a 25 °C.
• Limpie la celda y la jeringa del ITC, utilizando el protocolo y reactivos de limpieza recomendados.
  • Se recomienda enjuagar la celda del ITC con 20% de Contrad 70 / 14% de Decon 90, seguido de agua, después de cada experimento de ITC.
  • Realizar «remojos» regulares con 20% de Contrad 70 / 14% de Decon 90 en la celda del ITC, calentada a 60 °C, durante al menos 30 minutos. Enfriar la celda y enjuagar con agua. Si está trabajando con una proteína pegajosa u otra biomolécula, es posible que necesite hacer remojos de detergente con más frecuencia.
  • Asegúrese de enjuagar la jeringa del ITC con metanol y secarla antes de agregar el ligando.
  • También puede enjuagar la jeringa del ITC con varios volúmenes de solución de ligando.
• Llene la celda y la jeringa del ITC, utilizando los protocolos recomendados de llenado y carga. No es necesario desgasificar las muestras al utilizar el PEAQ-ITC y el ITC200.
  • Enjuague la celda del ITC con el tampón de la muestra, antes de llenar la celda del ITC con la muestra.

Configuraciones del ITC:

• Al usar datos de ITC para el cribado y comparación de parámetros de afinidad y termodinámicos, asegúrese de que todos los ajustes del diseño experimental sean los mismos, incluidos temperatura, modo de retroalimentación y condiciones de inyección.
• Consulte la Tabla 1 para las configuraciones recomendadas.

Para los sistemas automatizados MicroCal PEAQ-ITC y Auto iTC200:

• Asegúrese de que las muestras se almacenen a una temperatura adecuada antes del análisis ITC. Para proteínas y otras biomoléculas, ajuste la temperatura de la bandeja de almacenamiento de placas de 5 a 10 °C. Si está estudiando un material termoestable, puede ajustar la bandeja a 25 °C.
• Programe limpiezas de celda y jeringa utilizando 20% de Contrad 70 o 14% de Decon 90, utilizando rutinas de automatización adecuadas y durante el mantenimiento regular.

Más mejores prácticas estarán en futuros blogs.

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Publicaciones anteriores:

• Las mejores prácticas para ITC para estudiar interacciones de unión – Parte 1
• Las mejores prácticas para ITC para estudiar interacciones de unión – Parte 3
• Las mejores prácticas para la Calorimetría de Titración Isotérmica para estudiar interacciones de unión – Parte 4
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