¡Imprescindible para usuarios de MicroCal DSC! FAQ sobre el sistema DSC

por Malvern Panalytical, Monday, 25th February 2019

Verna Frasca, la gerente de aplicaciones de productos de MicroCal, responde a preguntas frecuentes sobre el nuevo producto de MicroCal DSC, PEAQ-DSC. También encontrará información útil aplicable para usuarios del VP-Capillary DSC. No dude en echarle un vistazo.


Lea este artículo en inglés aquí（Original aquí）

【Q1: ¿Cuál es la cantidad necesaria de muestra?】

PEAQ-DSC Automated requiere mínimo 325 μL, incluyendo el volumen muerto. En la práctica, se cargan 300 μL en la celda. Asegúrese de colocar la solución adecuadamente en la placa de 96 pocillos.

La placa de 96 pocillos puede llenarse hasta con 400 μL. En este caso, ingrese el volumen real configurado en “Load Settings” en “Well Plate Volume (μL)” (Figura 1). El PEAQ-DSC Automated toma en cuenta en el software la dilución de la solución causada por el autosampler. Durante el análisis, la información de concentración ingresada se ajusta según este factor de dilución.

Figura 1.

Para el PEAQ-DSC manual, se recomienda llenar 250 μL usando el micropipeta suministrado. Se aconseja preparar de 270 a 280 μL de muestra. En el sistema manual, no es necesario considerar la dilución de la solución.

【Q2: Para estabilizar el historial térmico, ¿cuántos escaneos de “Warm up” deben hacerse?】

En DSC, es importante estabilizar el historial térmico del sistema antes de medir una muestra repitiendo ciclos de calentamiento/enfriamiento desde el estado de espera. Tanto en el PEAQ-DSC manual como en el automatizado, si el sistema está limpio, es suficiente realizar dos o tres escaneos con agua-agua o buffer-buffer antes de medir la muestra.

Además, en PEAQ-DSC Automated puede marcarse “Assessment Setting” cuando el tipo de muestra es Buffer, lo que permite que se realicen automáticamente hasta 5 escaneos hasta que se complete el warm-up.

【Q3: ¿Qué es “Number of Purge Refills” en el PEAQ-DSC Automated (Figura 2.) y cómo se configura?】

“Number of Purge Refills” es la configuración que indica cuántas veces la solución en el pozo debe ser aspirada y dispensada con una jeringa antes de cargarse en la celda desde la placa de 96 pocillos. Con el autosampler, puede haber un gradiente de concentración si lava una solución con alta concentración de sal antes de la medición. Por eso, se recomienda aspirar/dispensar al menos tres veces para evitar diferencias de concentración que puedan afectar la reproducibilidad de los datos. Si se carga más de 325 μL en el pozo o si la solución es altamente viscosa, es recomendable realizar entre tres y cinco Purge/Refills.


Figura 2.

Para aquellos que usan el VP-Capillary DSC, el controlador “Number of Filling Strokes” en la pestaña “Advanced” tiene una función equivalente. Al igual que en el PEAQ-DSC Automated, se recomienda realizar de tres a cinco configuraciones.

【Q4: ¿Cuáles son las diferencias entre los ajustes de limpieza y cuál debería usar?】

Mantener la celda del DSC limpia es crucial para obtener datos de alta calidad. PEAQ-DSC Automated ofrece tres opciones de limpieza. Los detergentes recomendados son 14% Decon90 o 20% Contrad70, que deben colocarse en el recipiente 1.

La opción de limpieza seleccionada se ejecuta después de que finaliza el escaneo, antes de que se cargue la siguiente muestra. (Nota: en el VP-Capillary DSC, se realiza antes de comenzar el escaneo, después de que se complete la medición de la muestra anterior).

  • Enjuague: La celda se enjuaga con agua después de que finaliza el escaneo. El enjuague es recomendable para mediciones de agua-agua o buffer-buffer.
  • Lavado: La celda se limpia primero con detergente y luego con agua al finalizar el escaneo. Se recomienda realizar el lavado después de cada escaneo de muestra.
  • Escaneo: Después del escaneo, se llena la celda con detergente, se calienta según las condiciones programadas, luego se enjuaga con agua. Para evitar daños en la celda, ajuste Tend a 80 °C. El escaneo se recomienda después de la última muestra o si las muestras son altamente viscosas. Los datos del escaneo se guardan como “DETERGENTSCAN.dscx” y no se incluyen en los archivos DMES ya que no se usan para el análisis.

En caso de seleccionar Lavado o Escaneo, el enjuague con agua está configurado por defecto a 5 mL, pero se puede aumentar. Se ha verificado que 5 mL de enjuague son suficientes con 14% de Decon90 (o 20% de Contrad70) en PEAQ-DSC Automated. Sin embargo, dependiendo de las condiciones de la muestra o si se usan otros detergentes, el usuario puede necesitar ajustar el volumen de agua.

Además, tenga cuidado con el estado de la celda al comenzar una medición de PEAQ-DSC Automated. Al iniciar el sistema, la celda se vacía primero y se llena de inmediato con solución desde la placa de 96 pocillos sin limpieza previa. En caso de no usar el sistema por un largo período o si no está seguro del estado de limpieza de la celda, realice un procedimiento de limpieza apropiado desde la pantalla de “Mantenimiento”. PEAQ-DSC Automated está configurado para mostrar alertas si no se lleva a cabo el mantenimiento en un tiempo prolongado. (Figura 3)


Figura 3.

El VP-Capillary DSC también permite la configuración de limpieza desde la pestaña “Mantenimiento”. (Figura 4)

Figura 4.

Para el PEAQ-DSC manual, se recomienda realizar la limpieza siguiendo las instrucciones del video adjunto al software, utilizando 14% Decon90 o 20% Contrad70.

【Q5: ¿Qué material de referencia se utiliza durante el envío de PEAQ-DSC y la OQ (calificación operacional), y puede utilizarse como muestra de verificación?】

El Material de Referencia de MicroCal PEAQ-DSC es oligonucleótido y está disponible para compra. (Producto: Reference Material Kit, Número de catálogo: MCL2015) También es adecuado para usuarios de VP-Capillary DSC. El kit contiene reactivos para realizar el método recomendado dos veces.

【Q6: En VP-Capillary DSC, era necesario configurar el “Filtering Period”, pero PEAQ-DSC no lo requiere. ¿Por qué?】

En PEAQ-DSC, el Filtering Period se ajusta automáticamente según el Scan Rate. Cuanto más rápido es el Scan Rate, más corto se vuelve el Filtering Period (en segundos). El termograma obtenido se ajusta para contener la misma cantidad de puntos de datos con cualquier Scan Rate.

【Q7: Quiero guardar configuraciones de Load/Scan que uso frecuentemente al programar métodos en PEAQ-DSC. ¿Cómo puedo hacerlo?】

Seleccione la configuración de Load que desea guardar, haga clic en el botón de Guardar, nombre la configuración adecuadamente y guárdela. Las configuraciones guardadas se mostrarán en gris debajo de las opciones predeterminadas “Load” y “Scan”.


Figura 5.

【Q8: He ingresado mal la concentración de la muestra y quiero corregirlo. ¿Cómo puedo hacer eso?】

En la pantalla de “Análisis”, abra los datos y avance a la pantalla de “Ajuste”. Ingrese la concentración correcta en “Concentration (M)” debajo del termograma. Note que el diluyente causado por el autosampler no se aplicará automáticamente en este caso, por lo que deberá incluirse de antemano. Además, tenga cuidado ya que el factor de dilución cambia dependiendo del volumen de muestra configurado.
Al recalcular la concentración, tenga en cuenta el volumen remanente de 22 μL del buffer en la jeringa. Por ejemplo, si coloca 325 μL de una muestra de 10 μM en un pozo, ingrese 10e-6*325/(325+22)=9.37e-6 en Concentration (M).

Si desea cambiar la concentración de múltiples datos a la vez, selecciónelos en la lista “Records”, resáltelos y luego ingrese la nueva información de concentración en “Concentration (M)”. Si los datos están antes del ajuste de modelo, haga clic en “Restore” para confirmar. Si los datos han sido ajustados con Two-state o Non-Two-State, confirme seleccionando “Ajuste”.


Figura 6.

Una vez cambiado el nombre del archivo, se recomienda guardar con un nombre diferente.

【Q9: Quiero exportar los datos de DSC, ¿cómo puedo hacerlo?】

En PEAQ-DSC, puede guardar en formato de imagen o CSV. Vaya a la pantalla “Reportes” y seleccione el formato de reporte deseado. Desde la lista de “Records”, elija los datos a exportar (se pueden seleccionar múltiples). En la parte superior derecha de la pantalla que muestra los datos deseados, haga clic en el icono del Menú de Exportación para ver “Exportar Datos” y “Exportar Imagen”. (Figura 8) “Exportar Datos” le permite guardar los datos en formato CSV. Con “Exportar Imagen”, puede guardar la vista en el formato de imagen de su elección.


Figura 8.

【Q10: ¿Dónde puedo obtener el software más reciente o el manual de instrucciones?】

La versión más reciente del software de PEAQ-DSC es la 1.30. Puede obtenerla en los siguientes enlaces (fecha actual: 26 de febrero de 2019):

Para obtener información sobre actualizaciones de software, haga clic en “Notificación de actualización de software” y revise el documento ‘NOTIFICACIÓN DE ACTUALIZACIÓN DE SOFTWARE [SUN]’.

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