Por qué necesitas medir la carga superficial del mRNA-LNP (y cómo hacerlo)

En un blog anterior cubrimos la importancia de (y técnicas para medir) el tamaño de las nanopartículas lipídicas (LNPs). Aquí dirigimos nuestra atención a la carga superficial, brindándote conocimientos de expertos sobre por qué y cómo medirla mejor.  

Carga superficial: una medida clave para las LNPs

El interés en las LNPs ha explotado en los últimos años. Y es fácil ver por qué: estos vectores diminutos ofrecen la posibilidad de dirigirse a algunas de las condiciones médicas más desafiantes y pueden fabricarse a escalas que a menudo no son posibles con otros vectores de administración de medicamentos.  

Desarrollar y fabricar terapias y vacunas basadas en LNPs sigue siendo un gran desafío. Dado que las LNPs son tan complejas, la caracterización analítica es excepcionalmente desafiante: puede ser difícil saber qué atributos medir, y qué herramientas analíticas te ayudarán a responder tus preguntas.  

Una mirada por debajo de la superficie de la medición de la carga superficial  

Entonces, ¿cuál es el asunto con la carga superficial? ¿Por qué deberías medirla? ¿Y qué puede decirte?   

La carga superficial, también conocida como potencial zeta, es un atributo crucial para medir en el desarrollo de LNPs. No solo ofrece insights sobre el destino in vivo y la actividad de tu terapia (la carga superficial es quizás el determinante más importante de la solubilidad y la interacción con las membranas celulares), sino que también te proporciona información sobre la química superficial de tus LNPs (y cualquier modificación que pueda ocurrir durante el desarrollo y la fabricación).  

ELS — la herramienta preferida para medir la carga superficial  

La dispersión de luz electroforética (ELS) es la técnica preferida para medir la carga que tus LNPs adquieren en un medio particular.  

ELS es una técnica sencilla que funciona sobre el principio de la electroforesis. La solución de LNP se introduce en una célula que contiene dos electrodos (ver Figura 1), se aplica un campo eléctrico a través de ellos, y las partículas cargadas (en este caso LNPs) migran hacia el electrodo con carga opuesta con una velocidad relacionada con su potencial zeta. 

Un láser se pasa por la parte inferior de la celda, con las partículas cargadas dispersando la luz. Dado que la luz dispersada se desplaza en frecuencia en proporción a la velocidad de las partículas, medir la velocidad de esta manera permite a los analistas calcular el potencial zeta.   

Generalmente, ELS se utiliza para explorar la carga superficial de LNPs en solución salina tamponada con fosfato (PBS) o una versión diluida a 10x de tu muestra, donde los analistas pueden validar la carga superficial aparente de la LNP o evaluar diferentes formulaciones de LNP para la estabilidad y la eficiencia de absorción prevista, respectivamente. (Por supuesto, hay muchas más buenas razones para aplicar ELS en la caracterización de LNPs, que puedes descubrir en el eBook). 

Obtener las mejores mediciones de carga superficial  

Es importante notar que varios factores pueden impactar el potencial zeta de una partícula, incluidos:  

• Cambios en el pH  
• Fuerza iónica  
• La concentración de otros componentes en la solución  

Para asegurar mediciones reproducibles de potencial zeta, es crucial que informes el tampón de la muestra que has utilizado en tus mediciones, así como la conductividad correspondiente para el valor del potencial zeta.  

Superar un desafío clave   

Incluso si tienes en cuenta las recomendaciones anteriores en tus mediciones de potencial zeta, aún podrías ser impactado por quizás el mayor desafío en las mediciones de potencial zeta: muestras de alta conductividad.  

¿Interesado en saber más sobre este desafío y cómo superarlo mejor para asegurar las mediciones de carga superficial más precisas? Entonces mira nuestro eBook lleno de información, «Superando los desafíos en el análisis de vectores LNP: herramientas clave, técnicas y consideraciones« desarrollado por nuestros expertos analíticos.  

En él, cubrimos todo lo que necesitas saber para caracterizar tus LNPs con más confianza, ayudándote a

• desbloquear insights más profundos
• minimizar el uso de muestras
• ahorrar tiempo
• y reducir costos.  

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