저분자량 분석물의 표적 결합 동역학을 신뢰성 있게 측정하는 것은 여전히 어려운 과제입니다. 이러한 측정에서 표지를 도입하는 것은 불가능하기 때문에 무표지 방법을 적용하는 것이 신뢰할 수 있는 유일한 선택인 경우가 많습니다.
본 연구에서는 유전자 변형 플라젤린 층에 대한 Ni(II) 이온의 결합 동역학을 측정하여 다음을 보여줍니다. (1) 도파관 간섭법(GCI)은 매우 낮은 단백질 고정화 수준에서도 이온 결합을 해결하는 데 매우 적합합니다. (2) GCI는 사용 가능한 결합 부위의 수 및 강도를 확인할 수 있는 고품질 동역학 데이터를 제공합니다. (3) 결합 이벤트의 속도 상수도 높은 정확도로 얻을 수 있습니다. 실험은 니켈 반응 전사 인자 NikR의 C 말단 영역이 통합된 플라젤린 변이체를 사용하여 수행되었습니다.
GCI 결과를 적정 열량측정법의 친화도 데이터와 비교하였습니다. 마이크로 분자 해리 상수(Kd)가 특징인 저 친화성 결합 부위 외에도 사량체 Flic-NikRC 분자는 나노 분자 범위의 Kd 값을 갖는 고 친화성 결합 부위를 보유하고 있음을 발견했습니다. GCI를 통해 1pg/mm2 미만의 신호에서도 59Da 이하의 분자 질량을 가진 분석물의 특정 결합에 대한 실시간 동역학 데이터를 얻을 수 있었습니다.
저분자량 분석물의 표적 결합 동역학을 신뢰성 있게 측정하는 것은 여전히 어려운 과제입니다. 이러한 측정에서 표지를 도입하는 것은 불가능하기 때문에 무표지 방법을 적용하는 것이 신뢰할 수 있는 유일한 선택인 경우가 많습니다.
본 연구에서는 유전자 변형 플라젤린 층에 대한 Ni(II) 이온의 결합 동역학을 측정하여 다음을 보여줍니다. (1) 도파관 간섭법(GCI)은 매우 낮은 단백질 고정화 수준에서도 이온 결합을 해결하는 데 매우 적합합니다. (2) GCI는 사용 가능한 결합 부위의 수 및 강도를 확인할 수 있는 고품질 동역학 데이터를 제공합니다. (3) 결합 이벤트의 속도 상수도 높은 정확도로 얻을 수 있습니다. 실험은 니켈 반응 전사 인자 NikR의 C 말단 영역이 통합된 플라젤린 변이체를 사용하여 수행되었습니다.
GCI 결과를 적정 열량측정법의 친화도 데이터와 비교하였습니다. 마이크로 분자 해리 상수(Kd)가 특징인 저 친화성 결합 부위 외에도 사량체 Flic-NikRC 분자가 나노 분자 범위의 Kd 값을 갖는 고 친화성 결합 부위를 보유하고 있음을 발견했습니다. GCI를 통해 1pg/mm2 미만의 신호에서도 59Da 이하의 분자 질량을 가진 분석물의 특정 결합에 대한 실시간 동역학 데이터를 얻을 수 있었습니다.
