큰 약물 표적에 결합되는 작은 분자의 고감도 동역학 분석

이 기술노트에서는 도파관 간섭법(GCI) 기술이 고감도로 측정하는 확장된 감지 영역 덕분에 어떻게 Creoptix WAVE를 사용하여 큰 표적-분석물 분자량(MW) 비율(>300:1)의 결합 동역학을 정확하게 모니터링할 수 있는지 보여줍니다.

소분자와 약물 표적 사이의 상호작용에 대한 실시간 무표지 분석은 약물 발견 과정을 안내하고 유망한 약물 후보물질을 식별하는 데 유용한 정보를 제공합니다. 그러나 약한 결합체와 큰 표적-분석물 분자량(MW) 비율은 동역학 특성 분석을 매우 어렵게 만들 수 있습니다. 고감도로 측정하고 신속한 해리 속도(koff)를 확실하게 측정할 수 있는 능력이 필요한 경우가 많기 때문입니다. 

독점 도파관 간섭법(GCI) 기술을 사용하는 Creoptix® WAVE 는 동급 최고의 감도를 제공하여 낮은 신호 수준에서도 매우 정확한 동역학 데이터를 생성할 수 있습니다. 완강한 미세유체 기술과 결합된 GCI는 아세토니트릴 또는 고농도 DMSO와 같은 비공통 용제가 존재할 때 분자 상호작용을 특성 분석할 수 있습니다.

여기서는 카보닉 안히드라제 II(CAII)의 다양한 소분자 억제제의 결합 동역학을 측정하여 Croptix WAVE가 작고 약한 결합 약물 분자에 대해 뛰어난 분해능을 달성하여 표적 대 분석물 분자량 비율에 관계없이 완전한 동역학 특성 분석을 수행함을 보여줍니다. 

1 푸로세미드 2 4-술파모일벤츠 산 3 술파닐아미드 4 메틸술폰아미드 5a 아세타졸아미드 5b 아세타졸아미드
MW(Da) 330.74 201.20 172.20 95.12 222.25 222.25
고정화 수준(pg/mm2) 6050 6050 6050 6050 6050 1450
동역학 데이터
kon(M-1.s-1) 3.75x1044 2.98x104 2.67x104 1.15x104 1.31x106 1.22x106
koff(s-1) 0.051 0.040 0.180 3.37 0.038 0.031
km - - - - 1.17x107 -
Rmax(pg/mm2) 30.87 16.91 12.09 3.79 13.25 4.59
KD(μM) 1.4 1.3 293 293 0.029 0.026
평형 데이터
Rmax(pg/mm2) 33.37 14.57 11.75 3.34 14.05 4.83
KD(μM) 2.4 3.8 6 270 0.048 0.028

표 1: 카보닉 안히드라제 II(CAII)의 다양한 소분자 억제제의 동역학 및 평형 데이터

[그림 1 TN201001-Creoptix-kinetic-analysis-small-molecule-binding.jpg] 그림 1 TN201001-Creoptix-kinetic-analysis-small-molecule-binding.jpg

그림 1: 카보닉 안히드라제 II(CAII)의 다양한 소분자 억제제의 결합 동역학

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