La mesure fiable de la cinétique de liaison des analytes de faible poids moléculaire à leurs cibles reste difficile. Souvent, l'introduction du marquage est tout simplement impossible dans de telles mesures, et l'application de méthodes sans marquage est le seul choix fiable.
En mesurant la cinétique de liaison des ions Ni(II) aux couches de flagelline génétiquement modifiées, nous démontrons que : (1) l'interférométrie couplée au réseau (GCI) est bien adaptée à la résolution de la liaison des ions, même à des niveaux très faibles d'immobilisation protéique ; (2) elle fournit des données sur la cinétique de haute qualité à partir desquelles le nombre et la puissance des sites de liaison disponibles peuvent être déterminés, et (3) les constantes de vitesse des événements de liaison peuvent également être obtenues avec une grande précision. Les expériences ont été réalisées à l'aide d'une variante flagelline incorporant le domaine d'extrémité C-terminale du facteur de transcription NikR réactif au nickel.
Les résultats de la GCI ont été comparés aux données d'affinité du titrage calorimétrique. Nous avons constaté qu'en plus des sites de liaison à faible affinité caractérisés par une constante de dissociation micromolaire (Kd), les molécules FliC-NikRC tétramères possèdent des sites de liaison à haute affinité avec des valeurs Kd dans la plage nanomolaire. La GCI nous a permis d'obtenir des données sur la cinétique en temps réel pour la liaison spécifique d'un analyte avec une masse molaire aussi faible que 59 Da, même à des signaux inférieurs à 1 pg/mm2.
La mesure fiable de la cinétique de liaison des analytes de faible poids moléculaire à leurs cibles reste difficile. Souvent, l'introduction du marquage est tout simplement impossible dans de telles mesures, et l'application de méthodes sans marquage est le seul choix fiable.
En mesurant la cinétique de liaison des ions Ni(II) aux couches de flagelline génétiquement modifiées, nous démontrons que : (1) l'interférométrie couplée au réseau (GCI) est bien adaptée à la résolution de la liaison des ions, même à des niveaux très faibles d'immobilisation protéique ; (2) elle fournit des données sur la cinétique de haute qualité à partir desquelles le nombre et la puissance des sites de liaison disponibles peuvent être déterminés, et (3) les constantes de vitesse des événements de liaison peuvent également être obtenues avec une grande précision. Les expériences ont été réalisées à l'aide d'une variante flagelline incorporant le domaine d'extrémité C-terminale du facteur de transcription NikR réactif au nickel.
Les résultats de la GCI ont été comparés aux données d'affinité du titrage calorimétrique. Nous avons constaté qu'en plus des sites de liaison à faible affinité caractérisés par une constante de dissociation micromolaire (Kd), les molécules FliC-NikRC tétramères possèdent des sites de liaison à haute affinité avec des valeurs Kd dans la plage nanomolaire. La GCI nous a permis d'obtenir des données sur la cinétique en temps réel pour la liaison spécifique d'un analyte avec une masse molaire aussi faible que 59 Da, même à des signaux inférieurs à 1 pg/mm2.
