Indispensable pour les utilisateurs de MicroCal DSC! FAQ sur le système DSC

par Malvern Panalytical, Monday, 25th February 2019

Verna Frasca, la responsable des applications des produits MicroCal, répond aux questions fréquemment posées sur le nouveau produit MicroCal DSC, le PEAQ-DSC. Nous avons également des informations utiles pour ceux qui utilisent le VP-Capillary DSC. Nous vous invitons à lire cet article.

Lire cet article en anglais ici (version originale ici)

【Q1 : Quelle est la quantité d’échantillon requise ?】

Le PEAQ-DSC Automated nécessite au moins 325 μL, y compris le volume mort. En réalité, 300 μL sont remplis dans la cellule. Dans ce cas, assurez-vous de positionner la solution correctement dans une plaque 96 puits.

Les plaques 96 puits peuvent contenir jusqu’à 400 μL. Veuillez entrer la quantité de solution réellement installée dans le paramètre « Load Settings » à « Well Plate Volume (μL) ». (Figure 1.) Le PEAQ-DSC Automated tient compte de la dilution de la solution provoquée par l’automate lors de l’analyse. La concentration réelle entrée est automatiquement ajustée d’après le coefficient de dilution lors de l’analyse.

Figure 1.

Le PEAQ-DSC manuel utilise une micropipette fournie pour le remplissage de 250 μL. Il est recommandé de préparer un surplus d’échantillon de 270 à 280 μL. Dans le système manuel, la dilution de la solution n’a pas besoin d’être prise en compte.

【Q2 : Combien de fois devrais-je effectuer le scan « Warm up » pour stabiliser l’historique thermique ?】

Avec le DSC, il est important de stabiliser l’historique thermique du système en répétant les cycles de chauffage/refroidissement avant de mesurer réellement les échantillons, à partir de l’état de veille avant le lancement de la mesure. Que ce soit avec le PEAQ-DSC manuel ou automatisé, si le système est propre, il est suffisant d’effectuer le scan « Warm up » deux à trois fois avec de l’eau–eau ou du tampon–tampon avant de mesurer les échantillons.

Dans le PEAQ-DSC Automated, si vous sélectionnez Buffer comme type d’échantillon, une case peut être cochée sur « Assessment Setting », permettant ainsi au système de compléter automatiquement jusqu’à 5 scans de « Warm up ».

【Q3 : Qu’est-ce que « Number of Purge Refills » (Figure 2.) dans le PEAQ-DSC Automated ? Comment le régler ?】

Le « Number of Purge Refills » configure le nombre de fois que vous allez aspirer et évacuer la solution dans le puits avec une seringue avant de remplir la cellule depuis la plaque de 96 puits. Dans l’autosampler, si des solutions avec une forte concentration de sel sont placées sur la plaque avant la mesure, un gradient de concentration peut se produire. Par conséquent, effectuer la purge/remplissage seulement une fois peut entraîner un biais de concentration, modifiant la capacité thermique de la solution et entraînant une mauvaise reproductibilité des données. Nous recommandons donc au minimum de répéter le purge/remplissage trois fois. De plus, si la solution introduite dans le puits dépasse 325 μL ou est très visqueuse, il est conseillé de répéter la procédure purge/remplissage cinq fois.

Figure 2.

Pour ceux qui utilisent le VP-Capillary DSC, la fonction équivalente se trouve sous l’onglet « Advanced » avec « Number of Filling Strokes ». Comme pour le PEAQ-DSC Automated, l’utilisation d’un réglage de 3 à 5 fois est recommandé.

【Q4 : Quelles sont les différences entre les paramètres de nettoyage, et lequel devrais-je utiliser ?】

Maintenir la propreté des cellules DSC est essentiel pour l’obtention de données de haute qualité. Le PEAQ-DSC Automated propose trois options de nettoyage. Les détergents recommandés sont Decon90 à 14% ou Contrad70 à 20%. Le détergent est installé dans le réservoir 1.

L’option de nettoyage sélectionnée est effectuée après la fin du scan, avant que l’échantillon suivant ne soit rempli. (Note : pour le VP-Capillary DSC, le nettoyage est effectué avant le début du scan, après la mesure de l’échantillon précédent juste avant.)

Rinçage : La cellule est nettoyée à l’eau après la fin du scan. Le rinçage est recommandé pour les mesures eau–eau ou tampon–tampon.
Lavage : La cellule est nettoyée dans l’ordre avec du détergent puis de l’eau après la fin du scan. Il est conseillé d’effectuer le lavage après chaque scan d’échantillon.
Scan : Le détergent est injecté après le scan, et après que les conditions de scan suivantes programmées soient appliquées, l’eau nettoie la cellule. Dans ce cas, pour éviter d’endommager la cellule, réglez Tend à 80 ℃. Le scan est conseillé pour maintenir la propreté de la cellule après la dernière mesure de l’échantillon, ou dans le cas où l’échantillon est très visqueux, à effectuer pour chaque échantillon. Notez que les données Scan sont enregistrées sous « DETERGENTSCAN.dscx », mais ne sont pas utilisées pour l’analyse et ne sont pas incluses dans les fichiers DMES.

Si vous sélectionnez Lavage ou Scan, le nettoyage par l’eau est par défaut réglé à 5 mL, mais cela peut être ajusté. Avec le PEAQ-DSC Automated utilisant Decon90 à 14% (ou Contrad70 à 20%), il a été démontré que 5 mL d’eau suffisent. Toutefois, des ajustements de volume d’eau pourraient s’avérer nécessaires selon les conditions de l’échantillon ou en utilisant d’autres détergents, alors soyez vigilants.

De plus, vous devez veiller à l’état de la cellule au début des mesures de PEAQ-DSC Automated. Au démarrage du système, il vide d’abord l’intérieur de la cellule, puis remplit la solution des plaques de 96 puits sans nettoyage préalable. Par conséquent, si le système n’a pas été utilisé depuis un certain temps ou si vous ne savez pas si la cellule est propre, choisissez et exécutez la méthode de nettoyage appropriée depuis l’écran « Maintenance ». Notez que le PEAQ-DSC Automated est configuré pour afficher une alerte si un nettoyage n’est pas effectué pendant une période prolongée. (Figure 3)

Figure 3.

Avec le VP-Capillary DSC, un réglage de nettoyage de la cellule peut également être effectué depuis l’onglet « Maintenance ». (Figure 4)

Figure 4.

Pour le PEAQ-DSC manuel, il est conseillé de suivre le film fourni avec le logiciel pour effectuer le nettoyage à l’aide d’un Decon90 à 14% (ou Contrad70 à 20%).

【Q5 : Quel matériau de référence est utilisé lors de la livraison du PEAQ-DSC ou des tests OQ (Qualification Opérationnelle) ? Et ce matériau peut-il être utilisé comme échantillon de contrôle ?】

Le matériau de référence MicroCal PEAQ-DSC est un oligonucléotide et peut être acheté. (Nom du produit : Reference Material Kit, Numéro de catalogue : MCL2015) Il peut également être utilisé avec le VP-Capillary DSC. Ce kit contient des réactifs pour effectuer deux fois la méthode recommandée.

【Q6 : Lorsque j’utilisais le VP-Capillary DSC, il fallait régler la « Filtering Period », mais il n’y a pas cela dans le PEAQ-DSC. Pourquoi ?】

Dans le PEAQ-DSC, la « Filtering Period » est automatiquement ajustée en fonction du « Scan Rate ». Plus le « Scan Rate » est rapide, plus la « Filtering Period » est courte (quelques secondes). Pour les thermogrammes générés, le même nombre de points de données est collecté quel que soit le « Scan Rate » utilisé.

【Q7 : Comment puis-je sauvegarder les paramètres Load/Scan fréquemment utilisés lors de la création de méthodes sur le PEAQ-DSC ?】

Sélectionnez les conditions Load que vous souhaitez sauvegarder, cliquez sur le bouton Save, nommez et enregistrez en conséquence. Les conditions sauvegardées apparaissent sous le Load et Scan par défaut, affichées en gris.

Figure 5.

【Q8 : Comment puis-je corriger la concentration de l’échantillon si je me suis trompé ?】

Ouvrez les données dans l’écran « Analysis » et passez à « Fit ». Saisissez la concentration correcte sous « Concentration (M) » situé sous le thermogramme. Dans ce cas, la dilution auto-sampler ne s’applique pas automatiquement, il est donc nécessaire de la calculer au préalable. Notez que le coefficient de dilution peut également changer selon le volume d’échantillon préparé.
Lors du recalcul de la concentration, veillez à intégrer le tampon résiduel de 22 μL dans la seringue. Par exemple, si vous avez préparé un échantillon de 10 μM dans 325 μL et l’avez mis dans le puits, entrez 10e-6*325/(325+22)=9.37e-6 dans « Concentration (M) ».

Si vous souhaitez modifier la concentration pour plusieurs fichiers en même temps, sélectionnez les fichiers dans « Records » et mettez-les en surbrillance, puis saisissez la concentration dans « Concentration (M) ». Si les données ne sont pas encore ajustées au modèle, cliquez sur « Restore » pour appliquer les modifications. En cas d’ajustement Two-state ou Non-Two-State, cliquez sur « Fit » pour confirmer.

Figure 6.

Après modification de la concentration, une astérisque (*) sera ajoutée à côté du nom de l’échantillon dans « Records » et au « [Cell] (M) » dans « Record Information ». (Figure 7)

Figure 7.

Il est recommandé d’enregistrer les fichiers modifiés sous un nouveau nom.

【Q9 : Comment puis-je exporter les données DSC ?】

Avec le PEAQ-DSC, diverses options permettent de sauvegarder les données sous forme de graphiques ou de fichiers CSV. Sur l’écran « Reports », sélectionnez le format de rapport souhaité. Sélectionnez les données que vous souhaitez exporter dans la liste « Records » (vous pouvez sélectionner plusieurs données). Dans le coin supérieur droit de l’écran de visualisation des données, cliquez sur l’icône du menu Export pour afficher « Export Data » et « Export Image ». (Figure 8) « Export Data » vous permet de sauver les données au format CSV. « Export Image » vous permet de sauvegarder les formats graphiques sous une forme de votre choix.

Figure 8.

【Q10 : Où puis-je obtenir la dernière version du logiciel ou du manuel d’utilisation ?】

La dernière version du logiciel PEAQ-DSC est la version 1.30. Vous pouvez la télécharger depuis les liens suivants. (Valable au 26 février 2019)

Pour les informations de mise à jour du logiciel, cliquez sur « Notifications de mise à jour logicielle » et consultez absolument le message « SOFTWARE UPDATE NOTIFICATION [SUN] ».

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