Le chemin pour devenir maître du calorimètre Vol.3 Points clés pour la mesure et l’analyse avec le calorimètre à titrage isotherme iTC!

Eh bien, dans mon cas, je le laisse toujours allumé. Cela stabilise le système. Mais cela peut varier selon les laboratoires, donc je suggère de régler la température un jour à l’avance ou au moins une heure avant pour le démarrer. Si vous souhaitez stabiliser la ligne de base, n’hésitez pas à allumer le système à l’avance. Bien sûr, n’oubliez pas de régler la température de mesure !

D’accord. Ensuite, je vais remplacer l’eau ultrapure de référence. Cette opération doit être effectuée une fois par semaine, n’est-ce pas ? Que dois-je faire si je n’ai pas l’intention d’utiliser le système pendant plus d’une semaine ? Doit-elle toujours être changée ?

Si vous ne prévoyez pas de l’utiliser, il n’est pas nécessaire de le remplacer. Cependant, même si c’est de l’eau, si on la laisse elle peut se contaminer, alors changez l’eau ultrapure dans les deux cellules, échantillon et référence, au moins une fois par mois. Un point important ! Assurez-vous toujours que la mesure se termine avec de l’eau ultrapure fraîche dans les cellules. Si les cellules sont séchées et qu’elles contiennent de la saleté, cela pourrait s’agglomérer.

Je vois ! Ensuite, le nettoyage du système, n’est-ce pas ? Le manuel indique d’utiliser la commande du logiciel de contrôle. En sélectionnant Cell and Syringe Wash, des conseils apparaîtront à l’écran, il suffit de les suivre.

Oui, suivre les instructions ne pose aucun problème. Toutefois, si vous souhaitez un nettoyage plus approfondi, vous pouvez également utiliser d’autres commandes. Je pense que les significations de chaque commande sont dans le manuel, alors vérifiez-le.

Page 42 du manuel, non ?

Pour ceux qui souhaitent le manuel, veuillez nous contacter séparément.

Quant à moi, après la mesure de l’échantillon, je nettoie les cellules à chaque fois avec un détergent tel que 14% Decon90 ou 20% Contrad 70. Après avoir retiré l’échantillon mesuré, je le rince avec de l’eau ultrapure à l’aide d’une seringue à gaz contraignant. Ensuite, je remplis la seringue avec un détergent. Attention car cela fait beaucoup de mousse. Quand l’échantillon semble très sale, il pourrait être bon de le laisser reposer quelques minutes avec le détergent. Après avoir retiré le détergent, répétez plusieurs fois le rinçage « Cell Water Rinse (Long) » pour l’éliminer complètement. La propreté des cellules est la clé pour obtenir de bonnes données.

Je comprends. À propos des précautions pour le nettoyage des seringues ?

Dans un nettoyage ordinaire, assurez-vous visuellement qu’après l’étape de séchage, il n’y a pas de gouttelettes d’eau sur le verre de la seringue ou dans la position de propreté. Si de l’eau est présente, cela signifie que le séchage est insuffisant et que du méthanol pourrait se retrouver mélangé dans les échantillons de seringue. Par exemple, s’il y a une réaction endothermique importante alors qu’il s’agit d’une mesure eau-eau, le méthanol est probablement le coupable. Une installation incorrecte de l’adaptateur du port de remplissage est une cause probable.

Cet adaptateur du port de remplissage m’inquiète jusqu’à ce que j’en prenne le coup.

Cela peut sembler inquiétant, mais après deux ou trois utilisations, vous vous y habituerez sûrement ! Et, à propos du nettoyage des seringues, encore un point. Si une réaction thermique se produit dans une mesure eau-eau malgré l’absence de méthanol résiduel, il est possible que la seringue de titrage soit contaminée. C’est aussi dans le manuel, nettoyez-le avec un détergent selon les instructions.

Page 42, non ? La seringue semble avoir fini son séchage, donc je vais remplir l’échantillon. Pas de gouttelettes. L’échantillon doit être réchauffé à température ambiante à l’avance pour éviter les bulles. Si des bulles persistent, cela signifie-t-il qu’il vaut mieux dégazer l’échantillon ?

Pour l’iTC200, on dit que le dégazage est généralement inutile. À moins qu’il n’y ait des bulles visibles. Un léger centrage à température ambiante devrait suffire à les supprimer.

Je vois, un peu d’improvisation est nécessaire, non ? Ensuite, je remplis l’EDTA dans la cellule d’échantillon et le CaCl₂ dans la seringue de titrage. Pas de bulles entre le piston et le bouchon ! Les paramètres sont prêts aussi ! Go !! Dès que le DP se stabilise, le titrage débute.

Oui, voyons comment cela se passe.

Cette fois, Mr. Nakamura a aussi réglé la température de la jaquette à l’avance, ce qu’il avait oublié la dernière fois, et la seringue a commencé à tourner immédiatement. Si la température de mesure et la température réelle sont éloignées, la seringue ne tournera pas immédiatement.

Donc, professeur. La détermination de la stabilisation de la ligne de base est laissée au système, mais il est mentionné dans le manuel que l’on peut aussi en juger par soi-même…

Les critères de stabilisation de la ligne de base par le logiciel peuvent initier une mesure même s’il y a un léger drift. Comme l’iTC200 a un bon rapport S/N, cela n’affectera pas grandement les résultats de mesure. Ce que vous devez comprendre, c’est pourquoi la ligne de base devient instable ?

Attention à l’influence de l’air conditionné à l’installation du système, n’est-ce pas ?

Exactement. D’autres causes existent aussi. S’il y a un système avec un fort champ magnétique à proximité, cela peut également affecter les résultats. En cas d’influence par l’air conditionné ou un champ magnétique, une dérive régulière semblant ondulante pourrait être observée. Les bulles d’air dans les cellules peuvent aussi générer du drift. Cela peut être des bulles d’air présentes dès le départ ou une cellule sale générant des bulles. Si un échantillon se précipite sur une mousse dans la cellule d’échantillon, la ligne de base pourrait s’élever en droite ligne en raison de l’expulsion des bulles.

La valeur DP au début de la mesure doit se situer dans le ±1 µcal/sec, n’est-ce pas ?

Oui, mais ±1 µcal/sec semble être un critère de jugement quelque peu tolérant. C’est très important d’être aussi près que possible de la valeur définie. La ligne de base semble s’être stabilisée, non ?

Oui, autour de 9.7 µcal/sec. Oh, la mesure a commencé. Cela va prendre environ une heure, faisons une pause !

Attendez, Mr Nakamura. Quitter maintenant n’est pas une bonne idée.

Quoi !?

Vous devriez au moins attendre que le deuxième titrage soit terminé.

Jusqu’au deuxième titrage ?

Confirmer la valeur DP de la ligne de base était correct. Nous avons deux autres points de contrôle.

Deux points !?

D’abord, vérifier si la puissance de référence définie est appropriée pour l’interaction souhaitée. Pour l’association de biomolécules, 5 µcal/sec suffit. Pour EDTA et CaCl₂, nous avons réglé à 10 µcal/sec. Vous avez défini un petit volume pour le premier titrage, le vrai volume commence au deuxième.

Pour expliquer : en définissant les paramètres du titrage, vous avez réduit le volume du premier titrage par rapport à celui des mesures ultérieures. Lors du titrage, la seringue de titrage est en contact avec la solution dans la cellule d’échantillon, ce qui signifie que la concentration d’échantillon à l’interface peut se diluer. Ainsi, MicroCal ITC recommande d’ignorer le premier titrage pour l’analyse. Pour la puissance de référence, 10 µcal/sec dans le manuel est spécialement pour EDTA et CaCl2, mais pour les protéines, 5 µcal/sec suffit car la chaleur initiale reste en deçà de -1 µcal/sec. Une haute puissance de référence ajoute du bruit sans effet bénéfique.

La valeur de la puissance de référence indique la quantité de chaleur mesurable. Une puissance de référence de 10 µcal/sec permet de mesurer jusqu’à -10 µcal/sec de chaleur. Si le signal thermique dépasse l’axe Y, l’ajustement de puissance n’est pas suffisant.

Dans ce cas, peut-on modifier la puissance de référence en cours ?

Malheureusement, ce n’est pas possible. Seuls les paramètres d’injection peuvent être modifiés en cours.

Même en ajustant la puissance de référence pour poursuivre la mesure, la précision de la concentration, surtout cellule côté, n’est pas fiable, donc vous n’avez que l’option de recommencer une nouvelle mesure ou de continuer à titre indicatif.

Je comprends. Le premier titrage a moins de solution, c’est pourquoi il faut vérifier jusqu’au deuxième. Quel est le deuxième point ?

C’est l’espacement. En ITC, chaque réponse de titrage doit revenir à la ligne de base. Nous utilisons l’air sous le pic pour obtenir la chaleur de réaction. Si l’espace est insuffisant, le résultat ne reviendra pas à la ligne de base avant le prochain démarre, invalidant la surface calculée.

Les données actuelles … la réponse revient à la ligne de base dans la portée de puissance de référence. Cependant, du temps s’écoule après la base. Cela signifie qu’une modification de paramètre d’injection est possible ?

Exactement, Mr Nakamu !! Cependant, attention, parfois, comme dans l’image de gauche, la ligne de base peine à revenir lors de la fin de la titrage. Soyez attentif à l’espacement. Faisons une pause.

Oui !

À suivre…