PEAQ-ITC

Medición de alta sensibilidad de todos los parámetros de enlace.

El PEAQ-ITC, una tecnología MicroCal, es un calorímetro de valoración isotérmico de bajo volumen y alta sensibilidad para el estudio sin etiquetas en solución de interacciones biomoleculares. Permite realizar una medición directa de todos los parámetros de enlace en un solo experimento y puede analizar enlaces con afinidad leve o alta, utilizando solo una muestra de 10µg. El mantenimiento semi-automatizado reduce al mínimo la intervención del operador y el sistema se puede actualizar al PEAQ-ITC totalmente automatizado, por lo que es ideal para los laboratorios donde la velocidad, la sensibilidad y la capacidad para poder acomodar cargas de trabajo mayores en el futuro son factores de suma importancia.

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Información general

El sistema MicroCal PEAQ-ITC tiene una sensibilidad excepcional y es muy fácil de usar. El sistema mide directamente el calor que se libera o se absorbe durante los eventos de enlace bioquímico, del que se calcula la afinidad de enlace (KD), la estequiometría (n), la entalpía (ΔH) y la entropía (ΔS). Con optimización del sistema y una mínima preparación de la muestra, se generan los datos de un modo rápido y sencillo. La amplia gama de afinidad permite el análisis de aglutinantes con afinidad leve o alta con una excepcional reproducibilidad. MicroCal ITC es una herramienta esencial para cualquier laboratorio de investigación que estudia las interacciones biomoleculares, donde la alta sensibilidad y resultados rápidos son de suma importancia.

  • Los flujos de trabajo sencillos y guiados cuentan con videos de ayuda permiten a usuarios de todos los niveles generar datos de alta calidad.
  • La alta señal al ruido le da más confianza para acceder a los datos de calidad y relevancia de los parámetros termodinámicos y de afinidad generada.
  • El lavado automatizado con detergente de las celdas de muestra y de la jeringa de titulación lo ayudará a obtener datos reproducibles de alta calidad.
  • Todos los parámetros de enlace (afinidad, estequiometría, entalpía y entropía) en un solo experimento.
  • Rápido para dar los primeros resultados sin desarrollo de ensayo, libre de marcadores, sin inmovilización y sin limitaciones de peso molecular.
  • Sensibilidad para investigar cualquier interacción biomolecular usando tan solo 10 μg de proteína.
  • Mide directamente afinidades desde milimolares a nanomolares (KDS) (10-2 to 10-9 M).
  • Mide constantes de disociación de nanomolares a picomolares utilizando una técnica de enlace competitiva (10-9 to 10-12M).
  • Hastelloy no reactivo para la resistencia y compatibilidad química con las muestras biológicas.
  • Compatible con disolventes no acuosos.
  • Actualizable al sistema MicroCal PEAQ-ITC totalmente automatizado.

Se puede investigar una amplia variedad de aplicaciones con MicroCal PEAQ-ITC, entre las que se incluyen caracterización de interacciones moleculares de moléculas pequeñas, proteínas, anticuerpos, ácidos nucleicos, lípidos y otras biomoléculas. También puede utilizarse para medir la cinética enzimática. 

Software de análisis

El software de análisis MicroCal PEAQ-ITC permite realizar una simulación de diseño experimental, la evaluación en lote de grandes conjuntos de datos, la evaluación automatizada de la calidad de datos y cuenta con una interfaz de usuario simplificada que lo guía a las cifras finales y a la presentación de gráficos de calidad de un modo rápido y sencillo.

  • Permite abrir varios experimentos en una sola sesión.
  • Es compatible con muchos modelos de ajuste automático.
    • Disociación.
    • Cinética de la enzima - Múltiples inyecciones.
    • Cinética de la enzima - Una sola inyección.
    • Un conjunto de sitios.
    • Sitios de enlace secuenciales.
    • Un conjunto de sitios - SIM.
    • Dos conjuntos de sitios.
    • Competitivo.
  • Evaluación automatizada de la calidad de los datos.
    • Buena calidad de los datos - con enlace.
    • Buena calidad de los datos - sin enlace.
    • Mala calidad de datos - Comprobar datos.

Cómo funciona

Los microcalorímetros de titulación isotérmica miden el cambio de calor que se produce cuando interactúan dos moléculas. El calor se libera o absorbe como resultado de la redistribución y formación de enlaces no covalentes cuando las moléculas que interactúan pasan de estado libre a enlazadas. El ITC supervisa estos cambios de calor mediante la medición del diferencial de potencia que se aplica a los calentadores de celdas, necesarios para mantener en cero la diferencia de temperatura entre la celda de referencia y la celda de muestra cuando se mezclan los componentes de enlace. La celda de referencia por lo general contiene agua, mientras que la celda de muestra contiene uno de los componentes de enlace (la muestra, a menudo, pero no necesariamente una macromolécula) y una jeringa de agitación que contiene el otro componente de enlace (el ligando). El ligando se inyecta en la celda de muestra, por lo general en pequeñas alícuotas de 0.5 a 2 μL, hasta que la concentración del ligando sea 2 o 3 veces mayor que la de la muestra. Cada inyección de ligando da como resultado un pulso de calor que se integra con respecto al tiempo y se normaliza para la concentración para generar una curva de titulación de kcal/mol en comparación con la relación molar (ligando/muestra). El isotermo resultante se ajusta a un modelo de enlace para generar afinidad (KD), estequiometría (n) y entalpía de interacción (ΔH).

MicroCal PEAQ ITC Microcalorimeters for microcalorimetry and label free analysis using isothermal titration calorimetry

MicroCal PEAQ ITC Microcalorimeters for microcalorimetry and label free analysis using isothermal titration calorimetry

Especificación

General

Tipo de medición Afinidad (KD)
Entalpía ∆H
Entropía ∆S
Estequiometría (n)
Volúmen de muestra 280 µL
Volumen de celda 200 µL
Volumen de inyección de jeringa 40 µL
Precisión de volumen de inyección < 1% @ 2 µL
Rendimiento de muestra 0-12 por 8 horas al día
Material de celda Hastelloy
Celda En forma de moneda
Ruido 0.15 ncal/s
Rango de temperatura 2 °C a 80 °C
Estabilidad de temperatura ± 0.00012°C
Tiempo de respuesta 8 s*
Múltiples funciones de información Sí (pasivo, alta ganancia, baja ganancia)
Notas * El tiempo de respuesta del instrumento MicroCal PEAQ-ITC es una constante verdadera.  Es el intervalo de tiempo entre la primera desviación fuera del punto de referencia y el punto máximo que es un 63 % del punto máximo de altura.

Entorno de operación

Temperatura de operación (°C) 10°C a 28°C
Humedad de 0% a 70% RH, (sin condensación)

Clasificaciones eléctricas

Potencia 100 - 200 V, 50/60 Hz, 130 W
Peso 13.6 kg
Dimensiones (ancho, fondo, altura) 43 x 38 x 46 cm (calorímetro + estación de lavado)

Aplicaciones clave

Los instrumentos MicroCal PEAQ-ITC aportan valor a una amplia gama de aplicaciones, algunas de las cuales se describen a continuación.

Determinación de afinidad en sistemas biológicos

La ITC es ideal para medir afinidades y estequiometrías de interacciones biológicas con gran precisión. No requiere marcaje ni inmovilización de las moléculas interactuantes y no tiene limitaciones de masa molecular. Miles de artículos han utilizado la ITC para estudiar interacciones biológicas con proteínas, ácidos nucleicos, anticuerpos, carbohidratos, lípidos, ATP, inhibidores y compuestos farmacéuticos, entre otros.

Mecanismo de acción

¿Dónde se une el ligando al objetivo? ¿En el sitio activo o en el sitio alostérico? ¿La interacción es competitiva, no competitiva o acompetitiva con respecto a otros ligandos y cofactores? ¿La unión es cooperativa?

La ITC proporciona información valiosa sobre estos mecanismos de unión e interacción.

Cinética enzimática

¿Tiene un ensayo sencillo para su enzima? ¿Su ensayo requiere una configuración compleja? ¿La modificación del sustrato interfiere con sus estudios de SAR o de mecanismos?

La ITC puede utilizarse para estudiar cualquier reacción enzimática y solo requiere nano o picogramos de material, además de ser libre de marcadores.

Concentración micelar crítica (CMC)

La ITC se ha utilizado ampliamente para la determinación de CMC en una gran variedad de complejos micelares, incluyendo surfactantes, copolímeros en bloque, péptidos y proteínas con actividad superficial, así como surfactantes de tipo aminoácido y lípidos funcionalizados con amino.

Manuales de usuario

Descargas de software

05 November 2021

1.41

Analysis Software

  •     Maintenance release
1.41

05 November 2021

1.41

Control Software

  •     Maintenance release
1.41

12 January 2021

1.40

Analysis Software

  •     Maintenance release
1.40

12 January 2021

1.40

Control Software

  •     Maintenance release
1.40

23 April 2020

1.30

Control Software

  •     Maintenance release
1.30

23 April 2020

1.30

Analysis Software

  •     Maintenance release
1.30

20 March 2019

1.22

Control software
  • Maintenance release
1.22

20 March 2019

1.22

Analysis software
  • Maintenance release
1.22

03 September 2018

1.21

Control software
  • Windows 10 compatibility
  • Maintenance release
  • Licensing requirement
  • Adaptive Filter Disabling
1.21

03 September 2018

1.21

Analysis software
  • Windows 10 compatibility
  • Maintenance release
  • Licensing requirement
  • Adaptive Filter Disabling
1.21

17 April 2015

1.0

MicroCal ITC Origin Analysis software Dissociation model update
1.0

21 February 2018

1.0

MicroCal Concat ITC software
  • Initial release
1.0

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