Cromatografía líquida

Debido a que existen muchas combinaciones de fases móvil/estacionaria que se pueden emplear cuando se separa una mezcla, hay varios tipos diferentes de cromatografías que se clasifican según los estados físicos de esas fases. La cromatografía en columna líquido-sólido, la técnica cromatográfica más popular, presenta una fase móvil líquida que se filtra lentamente a través de la fase estacionaria sólida y arrastra consigo los componentes separados.

Depende de bombas para pasar un solvente líquido presurizado que contenga la mezcla de muestra a través de una columna llena de un material adsorbente sólido. Cada componente de la muestra interactúa de forma ligeramente diferente con el material adsorbente, lo que genera distintas velocidades de transporte para los distintos componentes y provoca la separación de los componentes a medida que salen de la columna.

Existen muchos tipos diferentes de técnicas y sistemas cromatográficos para una amplia gama de aplicaciones, todos definidos como cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC, del inglés “High Performance Liquid Chromatography”).

El análisis por HPLC se centra en el aislamiento de macromoléculas mediante interacción química, afinidad o volumen hidrodinámico. La SEC-HPLC funciona por interacción física con el medio poroso de las columnas de cromatografía, lo que constituye una diferencia notable entre la SEC y muchas otras técnicas de cromatografía líquida. La interacción química de la muestra con la columna no es necesaria ni deseada, ya que la separación debe basarse únicamente en el tamaño molecular (por el radio de Stokes de una partícula). La SEC se utiliza principalmente para el análisis de moléculas grandes como proteínas, polímeros y polisacáridos.
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En las columnas de la SEC, las moléculas más pequeñas en la muestra pueden ingresar en los poros del medio poroso, pueden residir allí más tiempo o ingresar en más poros con mayor frecuencia. Por otro lado, las moléculas más grandes de la muestra tienen más restringido el tamaño de los poros en los que pueden ingresar, ingresan con menos frecuencia o simplemente eluden los poros si son demasiado grandes para ingresar en ellos. 

Las moléculas más grandes, por lo tanto, fluyen a través de la columna más rápido que las moléculas más pequeñas, es decir, cuanto menor sea el tamaño de la molécula, mayor será el tiempo de retención. En la SEC/GPC recuerde que los grandes salen primero. 

Malvern Panalytical ofrece una gama de sistemas y detectores avanzados para la cromatografía de exclusión molecular (SEC, del inglés “Size-Exclusion Chromatography”), también conocida como cromatografía de permeación en gel (GPC, del inglés “Gel Permeation Chromatography”) o cromatografía de filtración en gel, para la medición del peso molecular absoluto, el tamaño molecular, la viscosidad intrínseca, las ramificaciones y otros parámetros físicos.