Conseils pour le nettoyage des cellules ITC

Il y a trois facteurs qui influencent le nettoyage.

・Solution de nettoyage (l’efficacité à éliminer les salissures à l’intérieur de la cellule)

・Fréquence (combien de fois l’opération de « nettoyage » est-elle répétée ?)

・Température (à quelle température le thermostat est-il réglé après avoir rempli les deux cellules avec la solution de nettoyage ?)

On considère que l’importance suit l’ordre de la solution de nettoyage > fréquence > température. Nous aborderons cela dans les sections suivantes.

Solution de nettoyage

Le principe fondamental d’une solution de nettoyage est de dissoudre la saleté sans dissoudre l’appareil.

Les cellules ITC sont fabriquées en Hastelloy C276, et d’autres matériaux de support comme les résines plastiques et l’acier inoxydable sont aussi utilisés. Lors de l’utilisation d’une solution de nettoyage, assurez-vous de choisir une solution qui ne corrode ni ne dissout ces matériaux. À part une solution de nettoyage recommandée telle que 14% DECON90 (ou 20% Contrad70), l’utilisation d’autres solutions comporte certains risques cités ci-dessus.

Pour les mesures avec des échantillons classiques tels que des protéines ou des acides nucléiques, il est généralement possible de nettoyer la plupart des salissures avec la solution de nettoyage recommandée de 14% DECON90. Dans la plupart des cas, pour les nouveaux appareils ou ceux faisant l’objet d’une maintenance régulière, 14% DECON90 suffit.

Cependant, selon le type et la gravité de la salissure, le nettoyage avec du DECON90 peut parfois ne pas être très efficace. Récemment, certains clients ont utilisé des composés moléculaires bas hydrophobes comme échantillons. Lorsqu’un problème de saleté des cellules survient, un nettoyage avec une solution à 50% de DMSO a prouvé son efficacité. Selon les besoins, on peut choisir d’autres solutions de nettoyage telles que ci-dessous.

・Solution aqueuse de 14% (v/v) DECON90

・Solution aqueuse de NaOH entre 1 et 5 N

・Solution aqueuse de 50% (v/v) DMSO

・Liquide vaisselle domestique dilué

・Nettoyant pour tuyaux dilué à double concentration (Pipe Unishin de Johnson & Johnson)

・Solution aqueuse de 1% (w/v) d’acide citrique

・Lessive avec enzymes protéolytiques

Fréquence

Avec la même solution de nettoyage et les mêmes conditions de trempage, il peut être possible d’éliminer les salissures en répétant plusieurs fois l’opération. Lorsque la salissure s’est accumulée, un seul nettoyage peut ne pas être suffisant. Évaluez l’efficacité du nettoyage par une titration eau-eau ou autre, et répétez plusieurs fois avec une solution qui a montré des effets significatifs, jusqu’à ce que le thermogramme atteint une bonne ligne de base.

Température

Comme beaucoup de détergents domestiques, l’efficacité pour éliminer les taches tenaces peut être augmentée en chauffant la solution de nettoyage lors de l’utilisation. Sous des conditions de haute température, il y a des risques de corrosion et des dommages aux cellules, donc assurez-vous de vérifier la résistance chimique des unités de cellules avec vos réactifs de nettoyage dans des documents ou autres. Les informations sur les matériaux (métaux, plastiques, etc.) utilisés dans les unités de cellules sont répertoriés à la fin du manuel d’utilisateur de l’appareil (en anglais). Si vous avez des questions, n’hésitez pas à demander.

Voici les méthodes spécifiques de nettoyage.

＜Précautions avant l’opération＞

・Les solutions de nettoyage peuvent être fortement basiques ou toxiques. Assurez-vous toujours de porter un équipement de protection adéquat lors de l’utilisation.

・Le trempage prolongé présente un risque de dessèchement ou de dépôt des solutions en raison d’un rinçage oubliée, ainsi que des taches de salissures incrustées.

Dans le pire des cas, il y a un risque d’endommagement irréversible des cellules. Veuillez donc suivre ces opérations sous votre propre responsabilité.

・Selon la salissure, remplacez la solution toutes les heures maximum, mais ne la laissez jamais tremper toute la nuit.

＜Matériel utilisé＞

・Solution de nettoyage

・Seringue à gaz

・Dispositif de nettoyage (pour les clients utilisant un VP-ITC, l’outil de nettoyage fourni avec un ThermoVac pour acheminer des solutions dans les cellules d’échantillon)

・Seringue cosmétiques (petit récipient de seringue pour les produits cosmétiques disponibles dans les magasins à 100 yens. Il est préférable d’utiliser des seringues de 20 mL avec des embouts aplatis)

＜Solution de nettoyage et conditions d’utilisation＞

・Solution aqueuse de 14% DECON90 (efficace pour les protéines et autres taches, recommandée pour la maintenance régulière. Température maximale de trempage 60 ºC pendant une heure maximum)

・Solution aqueuse de 5N NaOH (efficace pour les protéines, peptides, acides nucléiques, etc. Température maximale de trempage 60 ºC pendant une heure maximum)

・Solution aqueuse de 50% DMSO (efficace pour les composés moléculaires bas hydrophobes. Température maximale de trempage 50 ºC pendant 30 minutes maximum)

Autres solutions de nettoyage ayant fait leurs preuves :

・Liquide vaisselle domestique dilué 2 à 5 fois (efficace pour les lipides et autres huiles. Maximal de trempage température 50 ºC, 30 minutes max.)

・Nettoyant pour tuyaux dilué (efficace sur les substances colorées, protéines, Pipe Unish Pro. Température maximale de trempage 50 ºC, 30 minutes max.)

・1% acide citrique (dissout les taches avec des solutions acides, Ca, Mg, si les échantillons contiennent ces éléments dans les tampons, température maximale de trempage 50 ºC, 30 minutes max.)

・1% Zymit (désinfectant avec des enzymes protéolytiques. Achetez la solution concentrée et diluez-la selon les instructions du fabricant. Température maximale de trempage 25 ºC, pas plus de 12 heures)

＜Opération de nettoyage＞

1) Retirez l’eau ultrapure des deux cellules Sample/Reference. Retirez le bouchon de la cellule de référence

2) Remplissez les deux cellules avec la solution de nettoyage en utilisant une seringue à gaz (comme pour charger les échantillons)

3) Réalisez lentement des mouvements de pompage pour immerger complètement la solution de nettoyage dans les cellules

4) Videz les deux cellules des solutions de nettoyage

5) Rechargez une nouvelle fois les deux cellules avec la solution de nettoyage (enlevez l’excédent aussi complètement que possible. Utilisez la même procédure que pour remplir les échantillons)

6) Réglez la température des cellules à la cible déterminée

7) Utilisez des serviettes en papier ou autre pour couvrir les ports de cellules afin d’empêcher la poussière de pénétrer

8) Laissez tremper de 10 minutes à 1 heure selon le degré de salissure

9) Une fois le trempage terminé, remettez la température de la cellule à 25ºC (Attention : l’insertion de seringues alors que la solution est chaude peut endommager la seringue ou faire sortir la solution de la cellule)

10) Utilisez une seringue à gaz pour extraire délicatement la solution de nettoyage refroidie à température ambiante, puis rincez immédiatement la seringue avec abondamment d’eau ultrapure

11) Utilisez une seringue à gaz pour remplir les deux cellules avec de l’eau ultrapure et effectuez doucement des mouvements de pompage. Rincez complètement l’intérieur des cellules avec quelques allers-retours

12) Rincez au total avec 50-100 mL d’eau ultrapure chaque cellule Sample/Reference. Pour la cellule d’échantillon, l’utilisation du dispositif de nettoyage est utile

13) Nettoyez également la partie en coupe de la cellule d’échantillon et la partie sur laquelle est inséré le bouchon de référence, elles peuvent avoir été en contact avec la solution de nettoyage.

14) Insérez lentement la seringue dans la cellule pour éviter les dommages. Un contact rapide du métal de la pointe avec le fond de la cellule pourrait causer des rayures, du bruit ou pire, un dysfonctionnement.

Injectez autant que possible sans faire déborder de la cavité la solution de rinçage.

15) Une fois le rinçage terminé, remplissez les deux cellules avec de l’eau ultrapure.

＜Précautions lors des opérations de nettoyage＞

Assurez-vous de rincer les deux cellules avec suffisamment d’eau ultrapure. Pour la cellule Sample uniquement, utiliser un ThermoVac/Dispositif de nettoyage est aussi efficace.

Cependant, la cellule de référence être rincée de manière adéquate, donc veillez à rincer également la cellule de référence.