Meilleures pratiques pour la calorimétrie de titration isotherme pour étudier les interactions de liaison – Partie 2

Voici le deuxième blog des meilleures pratiques pour réaliser des expériences de liaison traditionnelles avec les systèmes MicroCal PEAQ-ITC, VP-ITC et ITC200.

Voici le premier : Meilleures pratiques pour la calorimétrie de titration isotherme pour étudier les interactions de liaison – Partie 1

Préparation de l’ITC :

• Effectuez une inspection visuelle du système ITC et vérifiez les connexions de câbles lâches, la seringue d’injection endommagée, les connexions de tuyaux qui fuient, la décoloration autour de la cellule, etc.
• Assurez-vous que l’eau est présente dans la cellule de référence ITC et remplacez l’eau régulièrement pendant l’utilisation de l’ITC (une fois par semaine est recommandé)
• Assurez-vous que l’ITC et le contrôleur sont allumés, que le logiciel de contrôle est ouvert, que l’instrument est en ligne et que le thermostat de l’instrument est réglé sur la température expérimentale.
  • Les ITC MicroCal peuvent rester allumés indéfiniment et être thermostatisés à 25 °C
• Nettoyez la cellule ITC et la seringue en utilisant le protocole de nettoyage et les réactifs recommandés.
  • Recommandez de rincer la cellule ITC avec 20% de Contrad 70/14% de Decon 90, suivi d’eau, après chaque expérience ITC.
  • Effectuez des “trempages” réguliers avec 20% de Contrad 70/14% de Decon 90 dans la cellule ITC, chauffée à 60 °C, pendant au moins 30 minutes. Refroidissez la cellule et rincez avec de l’eau. Si vous travaillez avec une protéine collante ou une autre biomolécule, vous devrez peut-être faire des trempages détergents plus fréquents.
  • Assurez-vous que la seringue ITC est rincée avec de l’alcool méthylique et séchée avant l’ajout du ligand.
  • Vous pouvez également rincer la seringue ITC avec plusieurs volumes de solution de ligand.
• Remplissez la cellule ITC et la seringue en utilisant les protocoles de remplissage et de chargement recommandés. Il n’est pas nécessaire de dégazer les échantillons lors de l’utilisation de PEAQ-ITC et ITC200
  • Rincez la cellule ITC avec un tampon d’échantillon avant de la remplir avec l’échantillon.

Réglages de l’ITC:

• Lors de l’utilisation des données ITC pour le dépistage et la comparaison des paramètres d’affinité et thermodynamiques, assurez-vous que tous les réglages de conception expérimentale sont les mêmes, notamment la température, le mode de rétroaction et les conditions d’injection.
• Voir le Tableau 1 pour les réglages recommandés.

Pour les systèmes MicroCal PEAQ-ITC et Auto iTC200 automatisés :

• Assurez-vous que les échantillons sont stockés à une température appropriée avant l’analyse ITC. Pour les protéines et autres biomolécules, réglez la température du plateau de stockage à 5 à 10 °C. Si vous étudiez un matériau thermostable, vous pouvez régler le plateau à 25 °C.
• Programmez le nettoyage des cellules et des seringues en utilisant 20% de Contrad 70 ou 14% de Decon 90, en utilisant des routines d’automatisation appropriées et pendant la maintenance régulière.

D’autres meilleures pratiques seront présentées dans les futurs blogs.

Contenu pertinent :

• Calorimétrie de titration isotherme : Théorie et Pratique
• Conseils pratiques pour les expériences MicroCal PEAQ-ITC
• Aborder la complexité des interactions de liaison avec ITC – tirez le meilleur parti de vos données ITC
• Biomolécules : qualité des échantillons et des données dans l’analyse des interactions – Deux faces d’une même pièce
• Ne jetez pas vos données ITC à “mauvaise” valeur N
• Standard de référence pour l’affinité de liaison

Articles précédents :

• Meilleures pratiques pour la calorimétrie de titration isotherme pour étudier les interactions de liaison – Partie 1
• Meilleures pratiques pour la calorimétrie de titration isotherme pour étudier les interactions de liaison – Partie 3
• Meilleures pratiques pour la calorimétrie de titration isotherme pour étudier les interactions de liaison – Partie 4
• Calorimétrie de titration isotherme – Un outil de caractérisation incontournable pour les interactions biomoléculaires
• Calorimétrie de titration isotherme : Un outil essentiel pour les mesures d’affinité de liaison en recherche en sciences de la vie
• Nouveautés dans l’ITC ? Édition de juin 2018