治療用蛋白質的聚集分析 ～亚可见颗粒（SVP）的定量分析及特性分析～
在治疗用蛋白质的聚集分析中，了解SVP（亚可见颗粒）的定量分析和特性分析的必要性、SVP的各种分析方法及马尔文·帕纳利蒂卡尔的分析结果，并了解颗粒特性分析及改善案例。
目录
- SVP解析方法1：宽范围跟踪的DLS、LD
- SVP解析方法2：适合单体至寡聚体的定量评价的SEC、AUC
- SVP解析方法3：追踪亚微米区域的NTA、RMM法
- 用于聚集体定量分析的颗粒特性分析及改善案例
- 马尔文·帕纳利蒂卡尔的相关分析设备
为何需要聚集体的定量分析和颗粒的特性分析
抗体药物等治疗用蛋白质中包含的聚集实际上无法通过肉眼确认。因此，需要使用某些分析设备进行何种程度的聚集包含的定量评估。
另一方面，为了区分检测到的颗粒是来自蛋白质、添加剂（如糖）还是其他杂质，同时也需要进行颗粒的特性分析（颗粒特性分析）。
这些颗粒大量存在于目视可见区域和完全不可见区域之间，因此也称为亚可见颗粒，或简称SVP。以下记录了SVP的各种分析及马尔文·帕纳利蒂卡尔的分析结果等。
用于聚集体定量分析的SVP解析方法及马尔文·帕纳利蒂卡尔的分析结果
包括FDA在内的各国和地区药典建议使用多台设备进行SVP评估。不幸的是，每种方法都有其优缺点，单一方法分析存在包含错误的风险。马尔文·帕纳利蒂卡尔在SVP解析领域备有多种设备产品线，其目的在于根据具体情况提供最佳方法。
此外，FDA在2014年发布了关于“生物药品免疫原性的评估”指南，其中一个项目提到了蛋白质聚集体的测量。
SVP解析方法1：宽范围跟踪的DLS、LD
DLS（动态光散射法） 和LD（激光衍射·散射法） 虽然是定性的，但由于具有广泛的动态范围，非常适合显示蛋白质的整体分布。
下图是通过DLS测量上市的治疗抗体（红色）和研究用IgG（绿色）的颗粒尺寸分布。治疗抗体显示出更清晰的分布，表明其完成度较高（形状更均匀）。
SVP解析方法2：适合单体至寡聚体的定量评价的SEC、AUC
为了进行定量评价，目前不存在覆盖所有范围的原理。SEC（体积排阻色谱法） 和AUC（分析型超速离心）等原理可以从单体（约10nm；全长抗体的情况下）进行定量评价。
其中尤其是SEC可以轻松计算单体/寡聚体比例。此外，若添加光散射检测器，则可以求出详细的分子量差异。
SVP解析方法3：追踪亚微米区域的NTA、RMM法
最近SVP中被认为特别多的亚微米区域（0.1 – 1 μm）的定量检测成为可能，对于这些区域，NTA法（纳米颗粒跟踪分析法） 和RMM法（共振式质量分析法）符合条件。
亚微米区域因为其大量存在容易进行定量评价，近年来被认为与免疫原性的大有关联性，因此FDA也强烈建议进行其测量。图表显示使用阿基米德（RMM法） 测得的结果，显示在稳定处方和不稳定处方之间明显的SVP量差异。
用于聚集体定量分析的颗粒特性分析及改善案例
FDA还建议进行颗粒的特性分析（颗粒特性分析），并建议“至少2种正交分析技术”（即使用两种以上的分析原理）。
颗粒特性分析的原则从“颗粒存在”开始。即由于检测到颗粒的性质不同，后续的改善方法也不同。
例如，如果该颗粒是蛋白质来源，应重新考虑蛋白质或处方；如果是纤维素碎片，则应重新考虑滤材或色谱柱材。在这种情况下，通过图像分析法及拉曼成像功能可以对仅通过形状判断困难的颗粒进行特性分析。
案例1：治疗抗体的生产过程改善
案例2：注射剂中的蛋白质聚集体和硅油油滴
在检测到非蛋白质材料作为颗粒的情况下，近年来特別增多的是预灌封注射器剂型（以下简称预灌封）。
预灌封是将蛋白质溶液灌入注射器中进行销售的制剂，但在注射器内部，为使活塞运动顺畅，涂有大量油脂（如硅油）。硅油本身虽无问题，但近年来报告表明硅油会促进蛋白质聚集，因此需要确认各自的量。
马尔文·帕纳利蒂卡尔的相关分析设备
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颗粒尺寸、Zeta电位、分子量测量装置 ZetaSizer系列 为纳米技术的研究、开发、质量控制贡献力量的颗粒尺寸、Zeta电位、绝对分子量的测量可通过ZetaSizer系列进行。各种与颗粒测量相关的复杂功能也能通过简单操作使用，具备丰富功能的装置。 |
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纳米追踪颗粒尺寸测量装置 NanoSight系列 通过跟踪颗粒的布朗运动，实现各颗粒的测量，获取高分辨率的颗粒尺寸分布及颗粒数量浓度。 |
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高灵敏度、高精度、高性能多检测器 GPC/SEC系统 OmniSEC 通过提高最大灵敏度的多检测器 GPC/SEC 系统，即便是稀薄样品及低分子量样品也能实现高精度、高再现性的测量。 |
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颗粒图像分析及拉曼光谱分析装置 Morphologi 4-ID 适用于药品、陶瓷、电池及化学品等领域的分析设备。全自动测量颗粒尺寸和颗粒形状。提供显著差异的测量可能性。 |
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