Diffusion Barrier method – the practical details

如何利用擴散屏障法測量電動電位？

擴散屏障法特別適用於低樣品體積和高離子強度緩衝液。該方法是將“插塞”形式的樣品小心地注入已經僅含緩衝液的折疊式毛細管電池中。（緩衝液必須與蛋白質製備的緩衝液相同，具有相同的電導率、pH值和添加劑，以便使樣品和擴散屏障盡可能匹配）。在這種設置中，主要關注的是電動電位，然而也可以確定尺寸。

實用細節在“擴散屏障技術，實用方面和數據解釋”中討論，並在“使用Malvern新擴散屏障法進行蛋白質zeta電位測量”錄音以及應用筆記“擴散屏障技術以獲得準確和可重複的蛋白質移動性測量”中介紹。以下是該方法的關鍵組成部分的簡要實用概覽。

為何考慮使用這種擴散屏障法？

考慮使用這種方法的主要原因有兩個，都與樣品有關。

1. 樣品量少：如果樣品量非常有限，即使僅部分電池中含有樣品，這種方法仍能實現測量（電池的其他部分則含有緩衝液）。
2. 保護樣品不受電極互動影響：在某些條件下（例如高離子強度，一些磷酸鹽，含硫緩衝成分）可能會發生電極變黑（退化）現象。變黑本身不一定是壞事，但它表示可能存在樣品-電極互動。

其他效應包括焦耳加熱、樣品降解（聚集）和電極極化。使用擴散屏障法可幫助將這些不利影響降至最低。

如何引入樣品？

使用凝膠加載吸頭將樣品輕輕注入充滿緩衝液的DTS1070毛細管電池中。我們測試了Costar移液吸頭（1-200µl，圓形，0.5mm厚，Sigma目錄號：4853），類似的應該也能很好地工作。使用時，輕輕推動凝膠加載吸頭穿過毛細管電池上的進樣口之一，直到感覺到“自然”的結束，然後首次注射70µl（這樣，就不會錯過插塞位置）。隨著對方法的漸漸熟悉，可以輕鬆把注射量減少到50µl，最終甚至到20µl。你可以用藍色葡聚糖溶液進行練習，或使用軟件中的計數率監視器（工具 – 計數率計）來確認散射體積在樣品插塞內。

在軟件中選擇哪些設置？

應選擇特殊的儀器設置，以便能夠在緩衝液中測量蛋白質樣品的zeta電位，即使該緩衝液的離子強度相對較高。 zeta分析軟件中的自動模式將降低應用電壓。但為了最溫和地處理敏感樣品，你可以按照以下表格中的應用筆記手動調整分析設置。

在手動或SOP設置期間，訪問設置的方法是：

• 測量 -> 測量持續時間 -> 自動 -> 最大運行次數
  將最小值保持在10，然後根據表格選擇最大值
• 測量 -> 測量 -> 測量之間的延遲（秒）
  重複測量時，讓樣品休息30秒是個好主意
• 測量 -> 高級 -> 電壓 -> 自動電壓選擇 -> 否
  根據表格輸入建議的電壓

之前

• 獲取最新的Zetasizer DTS軟件（免費下載）
• 複雜滴定 – 可變劑量（zeta和尺寸）
• 納米顆粒表徵的小貼士和技巧（44個問題和答案）
• 擴散屏障法的初始啟動博客

如果您有任何問題，請發郵件給我 ulf.nobbmann@malvernpanalytical.com。感謝！意見通常屬於作者。然而，我們的編輯團隊可能已修改了某些部分。