MicroCal DSC用戶必看！關於DSC系統的常見問題解答

經過 Malvern Panalytical, Monday, 25th February 2019

MicroCal產品應用經理Verna Frasca將回答關於MicroCal DSC新產品PEAQ-DSC的常見問題。即使是VP-Capillary DSC的用戶，也可以從中得到有用的知識。請務必閱讀。

在這裡閱讀本文的英文版（原文在此）

【Q1：所需的樣品量是多少？】

PEAQ-DSC自動化系統至少需要325 μL的最低用量，包括死容量。實際加注到細胞的是300 μL。此時，溶液必須正確地設置在96孔板中。

96孔板最多可以容納400 μL。在此時必須在“Load Settings”的“Well Plate Volume (μL)”中輸入實際設置的溶液量。（圖1）PEAQ-DSC自動化系統考慮了自動進樣器造成的溶液稀釋。分析時，實際輸入的濃度信息會考慮到這個稀釋倍率。

圖1。

在手動PEAQ-DSC中，使用附帶的微量移液器加注250 μL。建議準備270～280 μL的樣品以備不時之需。手動系統中無需考慮溶液稀釋。

【Q2：為了穩定熱歷史，需要做多少次“Warm up”掃描？】

在DSC中，在測量開始前從待機狀態轉換到實際樣品測量之前，反復進行升溫/降溫循環以穩定系統的熱歷史非常重要。無論是手動還是自動化PEAQ-DSC，只要系統符合清潔狀態，在測量樣品之前對水-水或緩衝液-緩衝液進行至少2至3次掃描，增溫就已足夠。

此外，PEAQ-DSC自動化系統中將樣品類型設置為Buffer時，可以勾選“Assessment Setting”，系統會自動進行最多5次掃描直到增溫完成。

【Q3：PEAQ-DSC自動化系統中的“Number of Purge Refills”（圖2）是什麼？如何設置？】

“Number of Purge Refills”是設置從96孔板向單元加注溶液之前，將溶液在孔中用注射器排放多少次。自動進樣器中，在測量前用板放置高濃度鹽水等溶液可能導致濃度梯度。因此，如果只進行一次液體出入，會導致濃度不均，溶液的熱容量會有所不同，從而使數據無法再現。因此，建議至少執行3次Purge/Refills。此外，当在孔中設置超過325 μL的溶液或粘度高时，建議重複5次Purge/Refills。

圖2。

VP-Capillary DSC的用戶可以通過“Advanced”選項卡中的“Number of Filling Strokes”來使用類似的功能。與PEAQ-DSC自動化一樣，建議使用3至5次設置。

【Q4：Clean settings的不同之處和如何選擇？】

保持DSC單元清潔對於獲得高質量數據至關重要。PEAQ-DSC自動化系統有三種清洗選項。推薦的清潔劑是14% Decon90或20% Contrad70。清潔劑放置在Reservoir 1中。

選擇的清潔選項在掃描完成後和加注下一個樣品之前進行。（注意：VP-Capillary DSC會在掃描開始前，在前一個樣品測量完成後進行清洗。）

Rinse：單元在掃描完成後用水清洗。建議在水-水測量或緩衝液-緩衝液測量時使用Rinse。
Wash：單元在掃描完成後按照清潔劑和水的順序清洗。建議在每次樣品掃描後進行Wash。
Scan：單元在掃描完成後充滿清潔劑，然後按照下次安排的掃描條件加熱，最後用水沖洗。在此期間為防止對單元的損害，建議將Tend設置為80 ℃。建議在最後一個樣品測量完成後或樣品高度粘稠的情況下每次樣品測量後執行Scan。Scan數據會保存為“DETERGENTSCAN.dscx”，但不會進行分析，所以不會包含在DMES文件中。

在選擇Wash或Scan時，默認情況下水清洗量為5 mL，但可以增加。在PEAQ-DSC自動化系統使用14% Decon90（或20% Contrad70）時，已證實5 mL水沖洗清潔即可。然而，在其他樣品條件或使用不同清潔劑時，用戶需決定所需水量，請注意。

此外，需要注意在PEAQ-DSC自動化測量開始時單元的狀態。啟動系統時，首先會清空單元，不進行單元清洗，直接從96孔板填充溶液。因此，如果長時間未使用或不確定單元是否清潔，請在“Maintenance”屏幕上選擇合適的清洗方法進行執行。此外，PEAQ-DSC Automated系統在長時間不進行清洗後會顯示警告。（圖3）

圖3。

在VP-Capillary DSC中，也可在“Maintenance”標籤下設置單元清洗。（圖4）

圖4。

對於手動PEAQ-DSC，建議使用14% Decon90（或20% Contrad70）進行清洗，並參照附帶的軟件影片。

【Q5：PEAQ-DSC交付及OQ（Operational Qualification）時使用的Reference Material是什麼？可以作為驗證樣品嗎？】

MicroCal PEAQ-DSC參考材料為寡核苷酸，可供購買。（產品名稱：Reference Material Kit，目錄號：MCL2015）在VP-Capillary DSC中也可使用。本套件包含可執行推薦方法兩次的試劑。

【Q6：在使用VP-Capillary DSC時需要設置“Filtering Period”，但在PEAQ-DSC中沒有這個設置。為什麼？】

在PEAQ-DSC中，Filtering Period是基於掃描速率自動設置的。掃描速率越快，Filtering Period越短（幾秒）。調整後獲得的熱譜圖在任何掃描速率下都獲取相同數量的數據點。

【Q7：如何保存PEAQ-DSC中常用的Load/Scan設置？】

選擇希望保存的Load條件，點擊Save按鈕，適當命名後保存。保存的條件將在默認的“Load”和“Scan”下以灰色顯示。

圖5。

【Q8：如何更改错误的样品浓度？】

在“Analysis”屏幕上打開數據，進入“Fit”屏幕。在熱譜圖下方的“Concentration (M)”中輸入正確的浓度。此時由自動進樣器引起的稀釋不會自動反映，因此需要預先計算。此外，根據設置的樣品量，稀釋比率也會改變，請注意。
在重新計算浓度時，需考慮注射器內剩餘的22 μL緩衝液。例如，將325 μL的10 μM樣品設置到孔中，輸入10e-6*325/(325+22)=9.37e-6到Concentration（M）。

如果希望一次将多个数据更改為相同的浓度，請在“Records”列表中選擇、突出顯示，然后在“Concentration (M)”中輸入濃度信息。若在模擬擬合前，請點擊“Restore”以確定。對於Two-state或Non-Two-State擬合的情況，點擊“Fit”以確定。

圖6。

更改濃度後，星號（*）將被添加到“Records”樣品名旁及“Record Information”的“[Cell] (M)”。（圖7）

圖7。

建議在更改後另外保存文件名。

【Q9：如何匯出DSC數據？】

PEAQ-DSC支持以圖和CSV格式保存。在“Reports”屏幕中選擇所需的報告格式。從“Records”列表中選擇要匯出的數據。（支持多選）查看數據的屏幕右上角點擊Export Menu圖標，會顯示“Export Data”及“Export Image”。（圖8）“Export Data”支持CSV格式數據保存。“Export Image”支持以偏好的圖形格式保存圖像。