グレーティング結合干渉は、遺伝子操作されたタンパク質層へのNiイオンの結合速度と親和性を明らかにします

低分子量検体のターゲットへの結合速度を確実に測定することは、依然として困難な作業です。このような測定では、ラベルの導入は単純に不可能であり、ラベルのない方法の適用が唯一の信頼できる選択です。 

Ni(II)イオンの遺伝子組み換えフラジェリン層への結合速度を測定することにより、次のことを実証します。(1)グレーティング結合干渉(GCI)は、タンパク質の固定化レベルが非常に低い場合でも、イオンの結合を解決するのに適しています。(2)利用可能な結合部位の数と強度を決定できる高品質の速度論データを提供し、(3)結合イベントの速度定数も高い精度で得ることができます。ニッケル応答性転写因子NikRのC末端ドメインを組み込んだフラジェリン変異体を使用して実験を行いました。 

GCIの結果は、滴定熱量測定からの親和性データと比較されました。マイクロモルの解離定数(K_d)を特徴とする低親和性結合部位に加えて、四量体のFliC-NikRC分子は、ナノモル領域のK_d値を持つ高親和性結合部位を持っていることがわかりました。GCIにより、1 pg/mm²未満の信号でも、59 Daという低いモル質量の分析物の特異的結合に関するリアルタイム速度データを取得することができました。