カロリメーターマスターへの道 Vol.7 DSC測定2回目
DSC測定のポイントは溶液の充填！(その2)

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ここに登場する人物とストーリーはフィクションです。
テクニカルに関する内容に関しましては、大阪府立大学客員研究員　深田先生にご助言をいただいております。

ページ下の「ダウンロード」ボタンより、
本文中に登場する、仲村さんがまとめた、「深田先生に確認することメモ (DSC)とその回答」がダウンロードできます。

(その1からの続き)

3スキャン目の温度が下がってきました。30℃くらいになったら圧力キャップを外して、超純水の交換ですね。緩衝液によるコントロール測定後のサンプル測定と想定して、サンプルセルから溶液を取り出し、あらたに超純水を充填してみます。

はい。落ち着いて実施してくださいね。

	操作をする前に、超純水をThermoVacで脱気開始。その間にキャップを外し、圧力センサーに圧力プラグをセット。今回はフィリングファンネルを使わず、セルにルアーキャップシリンジのつけたニードルを、セルの底にぶつけないように静かに挿入して超純水を抜き取る。サンプルを連続測定する場合はThermoVacによる洗浄操作がここで加わりますね。だとすると、少し早めにサンプルの脱気をすべきですね。

	そうですね。時間配分に注意が必要ですね。

脱気した超純水をサンプルセルに充填完了。Scanが開始される前に作業を終了することができました。ところで先生。サンプルを連続して測るときにもThermoVacでの洗浄は必須ですか？

	操作もそれほど難しくないので私は使用していますよ。ただ、流す量はセル容量の10倍程度、洗剤と超純水を流せばよいと思います。もちろん最後に緩衝液でのリンスを、シリンジを使って行うことが重要ですね。

緩衝液による共洗いですね。あ、PreScan Thermostatの15分が終了して、Final Equilibrationに入りました。モニターを見るとDP値が限りなくゼロに近づいていますね。

	そうですね。あと数分で測定が開始されますから様子をみてみましょう。

DP値、問題なさそうです。あとは測定結果を待つのみですね。

	そうですね。この間に、ご用意いただいた質問についてお答えしますね。

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	ベースラインの再現性のよいデータが取得できたみたいですね。

よかったです！ポイントは溶液の充填、ですね。

	そうですね。それさえマスターすれば、DSC測定は難しくはありません。あとは、いかにセルをきれいに保つか、が重要です。今後、実際のサンプルを測定すると、タンパク質が変性して凝集を起こすことがあります。そのようなデータが得られた場合、直ちに測定を中止し、サンプルセルを洗浄する必要があります。

凝集したかしていないか、どこで判断することができるのですか？

	測定途中でレスポンスが急激に下がる現象が起こります。 これは、タンパク質の凝集反応です。このような現象が起きたら、すぐに測定を止めてください。セル汚れの原因になります。なお、すぐにと言っても高温で圧力キャップを開けるのは危険ですから、30℃くらいまで下がったら直ちに、取扱説明書の「汚れがひどいときの洗浄方法」の指示に従い洗浄を行ってくださいね。

はい、わかりました。では先生、このようなサンプルはDSCで測定は難しいということになるのでしょうか？

	条件を変えることで測定が可能になる場合もあります。例えば、 サンプルの濃度を下げるのも１つですね。また、緩衝液の種類、pHや塩濃度を変えたり、scan rateを速くして、高温にさらされる時間を短くして対応する、なども考えられます。

わかりました！ありがとうございます。

以下の「ダウンロード」ボタンより、本文中に登場した、「深田先生に確認することメモ (DSC)とその回答」 がダウンロードできます。
(その1でダウンロードできるものと同じです。)

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