最佳實踐指南：等溫滴定量熱法研究結合相互作用——第二部分

這是使用 MicroCal PEAQ-ITC、VP-ITC 和 ITC200 系統進行傳統結合實驗的第二篇最佳實踐博客。

這是第一篇：ITC 研究結合相互作用的最佳實踐——第一部分

準備 ITC：

• 對 ITC 系統進行目視檢查，檢查是否有鬆動的電纜連接、損壞的注射針筒、漏氣的管道連接、細胞周圍的變色等問題。
• 確保 ITC 參考細胞中的水正常使用，並在 ITC 使用過程中定期更換水（建議每週更換一次）。
• 確保 ITC 和控制器已開啟，控制軟件已打開，儀器處於在線狀態，且儀器的恆溫設備設定為實驗溫度。
  • MicroCal ITCs 可長時間保持開啟狀態，並在 25 °C 下進行恆溫。
• 使用推薦的清潔協議和試劑清潔 ITC 細胞和針筒。
  • 建議每次 ITC 實驗後用 20% Contrad 70/14% Decon 90 及水沖洗 ITC 細胞。
  • 定期用加熱到 60 °C 的 20% Contrad 70/14% Decon 90 將 ITC 細胞進行“浸泡”至少 30 分鐘。冷卻細胞並用水沖洗。如果您正在處理粘蛋白或其他生物分子，您可能需要更頻繁地進行清洗。
  • 確保 ITC 針筒用甲醇沖洗並晾乾，然後再加入配體。
  • 您也可以用多次的配體溶液沖洗 ITC 針筒。
• 根據推薦的填充和加載協議填充 ITC 細胞和針筒。使用 PEAQ-ITC 和 ITC200 時不需要去除樣品中的氣體。
  • 在用樣品填充 ITC 細胞之前，用樣品緩衝液沖洗 ITC 細胞。

ITC 設置：

• 當使用 ITC 數據進行篩選和比較親和力及熱力學參數時，務必確保所有的實驗設計設置均一致，包括溫度、反饋模式和注射條件。
• 請參照表 1 了解推薦設置。

自動化 MicroCal PEAQ-ITC 和 Auto iTC200 系統：

• 確保樣品在適當的溫度下儲存，以進行 ITC 分析。對於蛋白質和其他生物分子，將板子儲藏托盤的溫度設置在 5 至 10 °C。如果您正在研究一種耐熱材料，可以將托盤設置為 25 °C。
• 使用 20% Contrad 70 或 14% Decon 90進行程序化的細胞和注射針筒清潔，並使用適當的自動化例行程序定期維護。

更多的最佳實踐將在未來的博客中介紹。

相關內容：

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早期文章：

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• ITC 研究結合相互作用的最佳實踐——第三部分
• 等溫滴定量熱法研究結合相互作用的最佳實踐——第四部分
• 等溫滴定量熱法——用於生物分子相互作用的熱門表徵工具
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