Kinetik-Leitfaden – Bindungskinetik mit dem WAVEsystem

Alle Creoptix-Produkte wurden unter dem Gesichtspunkt der Benutzerfreundlichkeit entwickelt. Gleichzeitig handelt es sich um hochentwickelte bioanalytische Instrumente, die qualifizierte Benutzereingaben erfordern. 

Um Sie bei der optimalen Nutzung Ihres Produkts zu unterstützen, haben wir die Fülle unseres internen Wissens und unserer Erfahrung in einem praktischen Handbuch zusammengefasst. Unsere Experten erläutern Ihnen die wichtigsten Grundsätze der Technologien, Techniken und Anwendungen. Wir bieten Informationen, Ratschläge und Tipps zur Versuchsanordnung und Datenanalyse. Ein separater Abschnitt zur Problembehandlung befasst sich mit den Situationen und Fragen, die unseren Kundendienstteams am häufigsten begegnen.

Wir hoffen, dass dieses Handbuch Sie bei Ihrer Arbeit unterstützt und zu Ergebnissen beiträgt, die Ihre Forschungsarbeit beschleunigen, ganz gleich, ob Sie es von der ersten bis zur letzten Seite lesen, bei speziellen Fragen darin nachschlagen oder es als praktische Erinnerung an Gleichungen und Protokolle aufbewahren.

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Was ist im Leitfaden enthalten?

Inhalt	Seite
1. Willkommen	5
2. Einführung	7
2.1 Einführung in die markerfreie Interaktionsanalyse	8
2.1.1 Definitionen der markerfreien Terminologie	12
2.1.2 Prinzipien der markerfreien Analyse	16
2.2 Das Creoptix WAVEsystem	19
2.2.1 GCI-Technologie	19
2.2.3 Verstopfungsfreie Mikrofluidik	21
2.2.3 GCI im Vergleich mit anderen markerfreien Biosensortechnologien	24
2.3 Anwendungsüberblick	26
2.3.1 Kinetik- und Affinitätsanalyse	26
2.3.2 Molekulares Screening	29
2.3.3 Bindungsspezifität	31
2.3.4 Konzentrationsanalyse	32
3. Versuchsanordnung	34
3.1 Sensorflächen	35
3.1.1 Chiptypauswahl	35
3.1.2 Chipkonditionierung	40
3.1.3 Immobilisierungsstrategien	41
3.1.4 Oberflächenregeneration	51
3.1.5 Ligandenregeneration	53
3.2 Ligandenimmobilisierung	56
3.2.1 Ligandendichte	56
3.2.2 Ligandenaktivität	59
3.2.3 Massentransportbegrenzung	60
3.2.4 Ligandenavidität	61
3.2.5 Unspezifische Bindung	62
3.3 Puffer	63
3.3.1 Allgemeine Überlegungen	63
3.3.2 Pufferzusammensetzung	63
3.3.3 Abgleich von Puffer und Probe	67
3.4 Referenzierung und Korrektur	69
3.4.1 Referenzierung	69
3.4.2 Doppelte Referenzierung	69
3.4.3 DMSO-Korrektur (Lösungsmittelkorrektur)	70
3.5 Assay-Format	75
3.5.1 Kinetik- und Affinitätsanalyse	75
3.5.2 Molekulares Screening	84
3.5.3 Bindungsspezifität und Konkurrenzexperimente	85
3.5.4 Konzentrationsanalyse	87
3.5.5 Probenrückgewinnung zur Identifizierung von Analytbindemitteln	91
4. Datenanalyse	97
4.1 Datenanpassung	98
4.1.1 Signalsprünge	99
4.1.2 Offsets	99
4.1.3 DMSO-Korrektur (Lösungsmittelkorrektur)	100
4.1.4 Nullproben	101
4.2 Datenauswertung	102
4.2.1 Auswertungsergebnisse und Qualität	103
4.2.2 Einstellungen und erweitertes Menü	105
4.2.3 Modellauswahl	109
4.2.4 Gleichgewichtsanalyse	116
4.3 waveRAPID	117
4,4. Abschirmung	119
4.4.1 Einstellungen	119
4.4.2 Datenreihendarstellung	119
4.4.3 Rangfolge/Treffer	120
4.4.4 Off-Raten-Screenings	120
5. Problembehandlung	122
5.1 Undichtigkeiten	123
5.2 Gerätestatus	123
5.3 Verzerrtes Signal	124
5.3.1 Verrauschtes Signal	124
5.3.2 Instabile/niedrige Amplituden	125
5.3.3 Signalspitzen/Phasenverluste	126
5.4 Ligandenimmobilisierung	127
5.4.1 Geringe Bindung	127
5.4.2 Geringe Ligandenaktivität	128
5.5 Kinetik	128
5.5.1 Keine Sättigung/überstöchiometrisches Signal	128
5.5.2 Kein Dissoziationssignal/lineare Assoziation	129
5.5.3 waveRAPID	129
6. Referenzen	130