血清中の抗体の親和性および反応速度

血清などの複雑な生体液中の分子相互作用のラベルフリー定量化により、治療用抗体検査の指針となる貴重な情報が提供されます。しかし、これらのマトリックスでは各種成分によってマイクロ流体が凝固するため、バイオセンサーに大きなストレスがかかることがよくあります。このため、重要なメンテナンスの実行中に、プログラムに長時間の遅延が発生する可能性があります。 

革新的なディスポーザブルマイクロ流体を採用したCreoptix WAVEは、目詰まりに高い耐性があります。これにより、物理的に関連するマトリックスの反応速度解析が可能になり、従来のSurface Plasmon Resonance (SPR)技術に匹敵する優れた知見を得ることができます。

各種濃度の血清を含むマトリックス中のHER2とトラスツズマブの相互作用を測定することにより、非凝固マイクロ流体技術を備えたCreoptix WAVEsystemが、生体液中の抗体結合の堅牢な反応速度解析を提供していることを示します。 

4PCP WAVEchIPでは、HER2-FC融合(Sino Biological、CN)がアミン結合を介して975 pg/mm ²のチャネルで固定化され、その後、すべてのチャネルでBSA不動態化(Roche、CH)により、チャネルあたりの総タンパク質が4200 pg/mm²に到達しました。すべての実験に使用された緩衝液(RB)は、0.5% BSAを添加したHBS-EP+です。トラスツズマブ(Absolute Antibody、英国)を150 ul/minで170秒間注入してから、300秒の解離ステップを実行しました。0%の血清条件場合、トラスツズマブを100% RBで調製し、20 Nm (4倍希釈系列)から希釈しました。 

50%の血清条件の場合、トラスツズマブを血清とRBが1:1 (V/V)で100 Nmから調製しました。90%の血清条件の場合、トラスツズマブは血清とRBが9:1 (V/V)で100 Nmから調製しました。再生成は、50 mm NaOH (1M NaCl)のパルスを注入することで毎回達成されました。測定値は、評価中にDMSOキャリブレーション、二重参照、バルク補正を使用して調整されました。

表1: 異なる血清濃度におけるHER2とトラスツズマブ間の相互作用に関する動的データ。

図1: 異なるマトリックス中におけるHER2とトラスツズマブ間の相互作用のセンサグラム