このテクニカルノートでは、CreoptixWAVEの優れた感度について説明します。高感度グレーティング結合干渉法(GCI)技術の検出範囲拡大により、極めて低い応答でも高分解能の反応速度測定が可能になり、材料コストの大幅な削減につながります。
分子相互作用のラベルフリー解析中、質量移行制限は一次速度則からの偏差の重大な原因となります。バルク溶液と表面間の検体濃度の勾配から生じる質量移行制限は、測定可能な結合信号を生成するためにしばしば必要とされる、高密度リガンド固定レベルで特に顕著になります。
Creoptix Waveは、独自の高感度グレーティング結合干渉法(GCI)技術を使用して、特に低活性タンパク質の低固定レベルで、従来のSurface Plasmon Resonance (SPR)方法よりも優れた感度を実現します。これは、極めて高い応答(Rmax <1)でも、信頼性の高い反応速度に変換されます。
Creoptix WAVEは、酵素の異なる固定密度を使用し、アセタゾールアミドと炭酸脱水酵素II間の相互作用を特性評価することにより、質量移行制限を回避しながら、サンプルの消費量を大幅に削減することができます。
| CAII取得レベル
(pg/mm2) | kon (M-1.s-1) | koff (s-1) | km | Rmax (pg/mm2) | KD (nM) | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 動的データMTLモデル | 8100 | 1.29x106 | 0.0418 | 6.12x106 | 18.688 | 32.5 |
| 動的データ1:1モデル | 1240 | 0.77x106 | 0.0324 | - | 0.469 | 42.3 |
表1: 異なる炭酸脱水酵素II（CAII）密度へのアセタゾールアミド結合の動的データ
凡例: (A) 低固定および高固定密度でのアセタゾールアミド(検体、MW 222.25 Da)と炭酸脱水酵素II (CAII、リガンド、MW 29 kDa)間の相互作用を示すセンサグラム。図示のように、CAIIは異なる固定密度の4PCH WAVEchipで捕捉されています。各固定レベルでアセタゾールアミドの容量反応曲線が記録されています。相互作用がCreoptix WAVEcontrolソフトウェアを使用した1:1モデル(右)から逸脱しているため、高固定レベル(左)からのデータを適合させるために質量移行制限(MTL)モデルを使用しています。(B) このデータは、低固定化レベルでの反応速度適合が質量移行制限されずに、一次速度則に従っていることを示しています。
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図1: 異なる炭酸脱水酵素II (CAII)密度へのアセタゾールアミド結合
