概要
MicroCal PEAQ-ITC Automatedは、高感度のMicroCal PEAQ-ITCのコアシステムを兼ね備えるとともに、完全自動化が可能であるため、多忙な研究や創薬研究所での生産性のニーズを満たします。
このシステムは生化学的結合時における発熱または吸熱をダイレクトに測定し、その測定値から結合親和性(KD)、結合比(n)、エンタルピー変化(ΔH)およびエントロピー変化(ΔS)を算出します。 適切な濃度にサンプルや試薬を調製する以外は、最小限のアッセイ開発で済み、迅速に測定結果が得られます。
使いやすく設計されたソフトウェアには、多様なサンプルタイプと条件に対応できるよう、最適化された測定の自動化スクリプトが搭載されています。

特徴と利点
- ユーザフレンドリーなデザインツールが、実験操作パラメータの選択をサポート。
- すべての結合パラメータ(解離定数、結合比、エンタルピー変化、エントロピー変化)をたった1回の測定で取得可能。
- アッセイ開発は最小限で済み、ラベル化、固定化は不要で、分子量制限もなく、測定結果が迅速に取得可能。
- 高いS/N比により、信頼性の高いデータ品質をもたらし、得られた解離定数、および熱力学パラメータの妥当性の評価が可能。
- 数mMからpMレベルの解離定数をもたらす優れたデータ品質(10-2〜10-12 M)。
- サンプル混合が最適化されたコイン形状セル。
- 非反応型のハステロイにより化学耐性と生体サンプルとの適合性を実現。
- わずか10µgのタンパク質を用いて生体分子の相互作用を評価できる高い感度。
- 温度制御された96ウェルプレート内にサンプルをセット。
- 完全自動システムにより無人動作が可能なため、生産性が向上。

動作
等温滴定型マイクロカロリメーターは、2つの分子が相互作用するときに生じる熱変化を測定します。 相互作用する分子がフリーの状態から結合状態に遷移すると、非共有結合の再分布と形成によって発熱または吸熱が起こります。
ITCはリファレンスセルと、結合パートナーが混合されることによって生じるサンプルセルとの温度差を、限りなくゼロにするために加えられたセルヒーターのディファレンシャルパワーを測定することによって、これらの熱変化をモニターします。
リファレンスセルは通常、水が充填されています。 サンプルセルには結合パートナーの片側の分子が含まれ、撹拌シリンジには、リガンドが充填されています。 リガンドをサンプルセルに通常0.5~2μLずつ、リガンド濃度がサンプルの2~3倍以上になるまで滴下します。

リガンドを滴下するたびに熱パルスが発生し、これが時間に対し積分、濃度でノーマライズされ、縦軸がkcal/mol、横軸がモル比(リガンド/サンプル)の滴定曲線が生成されます。
結果として得られる等温線を結合モデルにフィッティングして、相互作用の親和性(KD)、結合比(n)およびエンタルピー変化(ΔH)を導き出します。

概要
MicroCal PEAQ-ITC解析ソフトウェアでは、実験デザインシミュレーションのほか、大規模なデータセットのバッチ評価、データ品質の自動評価を実行できます。また、最適化されたユーザインターフェースにより、最終的なパラメータ値とプレゼンテーションに対応できるグラフを迅速かつ簡単に作成できます。
- 一度に複数の測定結果の解析が可能。
- 複数のフィッティングモデルをサポート。
- Dissociation.
- Enzyme Kinetics- Multiple Injections.
- Enzyme Kinetics- Single Injection.
- One Set of Sites.
- Sequential Binding Sites.
- One Set of Sites - SIM.
- Two Sets of Sites.
- Competitive.
- データクォリティの自動評価。
- Good quality data - Binding.
- Good quality data - No binding.
- Poor quality data - Check data.

Very good instrument, fast and easy to use."
Clarissa Melo Czekster — University of St Andrews