Жидкостная хроматография – это метод, используемый для разделения образца на отдельные части. Это разделение происходит на основе химического и физического взаимодействия образца с подвижными и неподвижными фазами. При разделении смеси могут быть использованы различные сочетания неподвижных/подвижных фаз, поэтому существует несколько разных типов хроматографии, классифицирующихся в зависимости от физического состояния этих фаз. Самый популярный метод – жидкостно-твердофазная колоночная хроматография – отличается жидкой подвижной фазой, медленно переходящей в твердую стационарную, в результате чего происходит разделение компонентов.

Метод основан на работе насосов, пропускающих жидкий растворитель под давлением, который содержит смесь образца, через колонку, заполненную твердым адсорбентом. Различные компоненты образца взаимодействуют с адсорбентом по-разному, что влияет на скорость перемещения и приводит к разделению компонентов по мере их вытекания из колонки.

Существует множество различных методов хроматографии и систем для решения широкого круга задач. Компания Malvern Panalytical предлагает ряд систем и современных детекторов для эксклюзионной хроматографии (SEC). Эксклюзионная хроматография, также известная как гель-проникающая хроматография (GPC) или гель-фильтрационная хроматография, используется для измерения абсолютной молекулярной массы, молекулярного размера, характеристической вязкости, разветвленности и других физических параметров.

В ходе данного метода разделение частиц происходит на основе молекулярного размера (гидродинамического радиуса частиц). SEC главным образом используется для анализа больших молекул, таких как белки, полимеры и полисахариды. SEC основывается не на химическом взаимодействии или сродстве, а на физическом взаимодействии с пористой средой хроматографических колонок – в этом заключается разница между методами SEC и GPC и многими другими методами жидкостной хроматографии.  Химическое взаимодействие образца с колонкой не является обязательным требованием.

В ходе SEC меньшие по размеру молекулы образца могут проникать в поры пористой среды, удерживаться в них дольше или попадать в большее число пор чаще. С другой стороны, большие молекулы образца более ограничены размером пор, в которые они могут проникать, и проникновение происходит реже или, если размер молекул не позволяет его совершить, не происходит вовсе. Таким образом, более крупные молекулы проходят через колонку быстрее, чем молекулы меньшего размера, поэтому чем меньше размер молекулы, тем больше время удерживания.   При использовании метода SEC/GPC помните, что крупные молекулы выходят из колонки в первую очередь.